Ecco che cosa emerge dalle inchieste del Financial Times e di Channel 4 su profitti, contratti e segreti di Pfizer, leader dei vaccini anti Covid
13/12/2021 - Si alza sempre di più il polverone sui profitti ottenuti dai super contratti stipulati per il vaccino anti Covid della casa farmaceutica statunitense Pfizer. Come Start anticipava un paio di settimane fa, un’inchiesta del Financial Times e ora una anche dell’emittente televisiva britannica, Channel 4, hanno portato alla luce come la biotech abbia ottenuto quasi il monopolio dei vaccini durante la pandemia da Sars-Cov-2.
IL POTERE DI PFIZER
Il FT ha raccontato quanto i leader occidentali abbiano “adulato” il Ceo dell’azienda Albert Bourla – tanto da arrivare a chiamarlo fino a 30 volte, come nel caso dell’ex primo ministro israeliano Benjamin Netanyahu – pur di ottenere una via preferenziale nelle consegne dei vaccini.
IL “MONOPOLIO”
A ottobre, scrive il quotidiano economico-finanziario britannico, Pfizer aveva l’80% di quota di mercato per i vaccini anti Covid nell’Unione europea e il 74% negli Stati Uniti.
A fare la fortuna della società è stata soprattutto la sua capacità di espandere rapidamente la produzione, rendendola il produttore di vaccini più dominante. Questo ha dato un grande potere a Pfizer che è riuscita a negoziare con capi di Stato e di governo da una posizione di forza, consentendole di stabilire i prezzi e l’ordine della lista dei Paesi che avrebbero ricevuto le dosi.
I PROFITTI
Pfizer, che finora ha consegnato più di 2 miliardi di dosi, prevede che le vendite del vaccino raggiungeranno i 36 miliardi di dollari nel 2021, almeno il doppio di quelle del competitor Moderna.
Mentre AstraZeneca ha accettato di vendere il vaccino al prezzo di costo durante la pandemia, Pfizer ha voluto assicurarsi i suoi profitti e il vaccino, che ora ha il marchio Comirnaty, sarà uno dei farmaci più redditizi della storia farmaceutica.
LE ACCUSE
Tom Frieden, ex direttore dei Centri statunitensi per il controllo e la prevenzione delle malattie (Cdc) sotto Barack Obama, citato dall’inchiesta di Channel 4 Dispatches, ha accusato Pfizer di aver approfittato della pandemia per meri interessi economici: “Se ti stai concentrando solo sulla massimizzazione dei profitti e sei un produttore di vaccini … sei un profittatore di guerra”.
IL VERO COSTO DEL VACCINO
Stando all’inchiesta di Channel 4, un esperto di ingegneria biologica ha sostenuto che il farmaco di Pfizer costa circa 0,90 centesimi per la produzione di ogni dose. I costi di produzione stimati non includono ricerca, distribuzione e altri costi.
LA STORIA DIETRO AL VACCINO
Il FT definisce inoltre la strategia di Pfizer “il più grande colpo di marketing nella storia della farmaceutica americana” perché senza la tedesca BioNTech probabilmente oggi la storia sarebbe andata in modo diverso.
È stato infatti Ugur Sahin, amministratore delegato della società, a iniziare a progettare un vaccino utilizzando la tecnologia mRna e a proporlo a Pfizer perché, non avendo prodotti approvati e quindi nessuna vendita o profitto, ha dovuto cercare un partner con maggiori finanziamenti e influenza.
“Non è nemmeno il loro vaccino”, ha detto al quotidiano un ex funzionario del governo Usa coinvolto nell’approvvigionamento dei vaccini.
L’ACCORDO CON BIONTECH E CON I GOVERNI
Mentre BioNTech, fa sapere il Guardian, ha preso fino a 375 milioni di euro di finanziamenti dal governo tedesco per lo sviluppo del vaccino, Pfizer ha rifiutato i soldi del governo americano per poter mantenere il controllo completo del vaccino, compresa la questione cruciale dei prezzi.
L’accordo tra le due case farmaceutiche prevede, infatti, che l’azienda tedesca riceva la metà dei profitti, ma è il colosso statunitense a controllare la commercializzazione del vaccino in tutti i Paesi tranne i territori di origine dei fondatori, Germania e Turchia, e la Cina, dove BioNTech aveva già firmato un accordo con Fosun Pharma.
A QUANTO È STATO E VIENE VENDUTO
Nei primi negoziati tra Pfizer e il governo degli Stati Uniti, all’inizio dell’estate 2020, l’azienda – scrive il FT – ha chiesto 100 dollari a dose, ma ben presto Bourla si sarebbe reso conto che un simile prezzo avrebbe messo a rischio la reputazione della società.
Moderna, che aveva preso grandi sovvenzioni dal governo americano, aveva accettato un prezzo molto più basso così che anche Pfizer alla fine si è accordata su 19,50 dollari a dose nel contratto iniziale con gli Stati Uniti, e l’equivalente in altri Paesi occidentali.
Ma questo, sottolinea il quotidiano, era comunque quattro volte il prezzo di una singola dose di Johnson & Johnson, e cinque volte più alto di una di AstraZeneca.
Ora, riporta il FT, l’Ue si aspetta da Pfizer un numero di dosi cinque volte maggiore rispetto a Moderna e, sebbene un tale impegno dovrebbe tradursi in un taglio dei prezzi, Pfizer ha aumentato il prezzo di più di un quarto rispetto al livello iniziale concordato, salendo da 15,50 a 19,50 euro, con il benestare della presidente di Commissione Ursula von der Leyen. Aumenti applicati anche negli accordi con i governi britannico e statunitense.
I SEGRETI DI PFIZER
Zain Rizvi, direttore di ricerca presso Public Citizen, un’organizzazione statunitense di difesa dei consumatori che ha esaminato i contratti globali di vaccinazione della Pfizer, ha detto: “C’è un muro di segretezza che circonda questi contratti ed è inaccettabile, soprattutto in una crisi di salute pubblica”.
“Il modo in cui Pfizer esercita il suo potere – e quello che ha intenzione di fare in futuro – è trattato come top secret”, riferisce il FT, “perché il produttore di vaccini copre grandi parti di contratti e vincola anche gli scienziati indipendenti con accordi di non divulgazione”.
Pfizer, scrive il Guardian, ha detto che gli accordi di riservatezza sono una pratica comune e la stima del costo di produzione del vaccino da parte di un esperto di ingegneria biologica era “grossolanamente imprecisa e priva di significato” perché non rifletteva i veri costi per portare il vaccino ai pazienti, compresi gli studi clinici, i maggiori sforzi di produzione e la distribuzione globale.
IL CASO UK
I ministri britannici, si legge nell’articolo, hanno concordato una clausola di segretezza in qualsiasi controversia con Pfizer sulla fornitura del vaccino in Gran Bretagna.
“[Il Regno Unito, ndr] È l’unico Paese ad alto reddito che ha accettato questa disposizione. Permette alle aziende farmaceutiche di aggirare i processi legali nazionali”, ha detto Rizvi. “Il governo britannico ha permesso alle aziende farmaceutiche di comandare. Come siamo finiti in una situazione in cui una manciata di aziende farmaceutiche sono state in grado di esercitare un tale controllo sui governi più potenti del mondo? Indica un sistema rotto”.
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Il Premio Nobel per la Medicina Luc Montagnier ha querelato l’infettivologo genovese Matteo Bassetti, accusandolo di diffamazione. A darne notizia è stato l’avvocato Tiziana Vigni , che rappresenta il Nobel francese.
La notizia logicamente è passata sotto silenzio dei Media mainstream che immagino devono proteggere l'immagine dei loro tronisti che propagandano il pensiero unico. I fatti.... Il 23 agosto nella piazza di Palazzo Doebbing a Sutri, Matteo Bassetti ci andò giù pesante per definire l’atteggiamento di Luc Montagnier sui vaccini. “Anche i premi Nobel rincoglioniscono. Credo abbia un problema di demenza senile”. E in un altro passaggio del suo intervento, il medico genovese aveva anche rincarato la dose: “Farebbe bene a spingere la carrozzina dei suoi nipoti”. Parole che non sono passate inosservate e, fin da allora, avevano aperto un forte dibattito sui social. Una questione che si risolverà in tribunale....
Narod.hr ricevuto da Assoc. dottor rer. nazionale Tomislav Domazet Bad video in cui presenta la sua presentazione scientifica e che pubblichiamo in questa occasione e portiamo un collegamento al suo lavoro scientifico finanziato da fondi pubblici. Tomislav Domazet-Lošo , dottore in genetica, professore associato presso la Facoltà di Medicina dell'Università Cattolica croata e uno dei nostri scienziati più rinomati, ha avvertito le persone che i vaccini mRNA sono estremamente pericolosi. 'Il mio messaggio è molto breve, sono qui per difendere la verità scientifica. Ho avuto a che fare con le molecole di mRNA per tutta la vita. So bene che sono incorporati nel genoma e che i vaccini a base di mRNA sono una terapia genica molto pericolosa e possono causare tumori e alterare il genoma dei nostri bambini. La vaccinazione è il tatuaggio molecolare e la distruzione delle generazioni future. Tutti quelli che ti dicono diversamente non ne hanno idea e non l'hanno studiata', sostiene lo scienziato.
In questa presentazione scientifica, il Dr. rer. nazionale Domazet-Lošo conclude quanto segue sui vaccini mRNA:
“I vaccini a mRNA per COVID19 si basano sulla falsità che le molecole di mRNA non sono incorporate nei genomi.
I produttori non hanno mai testato la possibilità di incorporare molecole di mRNA dai vaccini nei genomi e i regolatori non l'hanno mai chiesto, anche se avrebbero dovuto.
I documenti dell'agenzia di regolamentazione affermano chiaramente che la genotossicità e la cancerogenicità delle molecole di mRNA dei vaccini non sono mai state testate.
Per tutte le caratteristiche, le molecole di mRNA dei vaccini possono essere integrate nei genomi.
Tutte le soluzioni ingegneristiche applicate indicano che le molecole di mRNA dei vaccini, consciamente o inconsciamente, sono progettate per essere incorporate nei genomi il più facilmente possibile.
La possibile integrazione di molecole di mRNA dai vaccini nei genomi può causare tumori e malattie genetiche ereditarie.
Sulla base di tutto quanto sopra, è del tutto possibile che i vaccini mRNA avranno conseguenze devastanti per la popolazione e gli effetti più devastanti su donne incinte, bambini e giovani".
Sono Tomislav Domazet-Lošo, professore associato presso la Facoltà di Medicina di HKS e ricercatore associato presso l'Istituto Ruđer Bošković. Mi occupo scientificamente di genetica evolutiva, biologia dello sviluppo e medicina evolutiva.
Vorrei condividere con voi le conoscenze scientifiche che ho acquisito dal mio lavoro di ricerca nell'ambito del progetto Philostratigraphy of Gene Origin and Loss e del progetto DATACROSS della Croatian Science Foundation. Data l'estrema importanza di questi risultati e il drammatico sviluppo della situazione nel mondo, ho deciso di parlare attraverso questo video. E questo è il mio dovere, dopotutto.
D'altra parte, posso dire che sono profondamente preoccupato, perché quando interrogarsi e porre domande diventa indesiderabile - e questo è particolarmente vero negli ambienti scientifici - allora sappiamo che la società è entrata nella tirannia e nel totalitarismo.
Con l'avvento del primo vaccino contro l'mRNA COVID-19 alla fine del 2020, i media hanno affermato in modo invadente che le molecole di mRNA non possono essere incorporate nel genoma. Questo mi ha sorpreso molto perché so che le molecole di mRNA sono incorporate nei genomi e che questo è uno dei meccanismi importanti dei nuovi geni.
Interessato a questa strana affermazione, ho cercato di trovare alcune informazioni aggiuntive nell'mRNA della vaccinologia. Ho pensato che fosse possibile che qualche intervento di ingegneria genetica rendesse le molecole di mRNA del vaccino resistenti all'incorporazione nel genoma, quindi il problema è stato risolto.
Tuttavia, con mia grande sorpresa, la prima cosa che ho notato è stata che la vaccinazione con mRNA come disciplina, per qualche inspiegabile ragione, non è a conoscenza del fatto che le molecole di mRNA sono spesso incorporate nei genomi. Questo fenomeno molto strano mi interessava scientificamente, quindi ho deciso di chiarire fino in fondo questa illogicità.
Prima di arrivare alle credenze pseudo-scientifiche sulla vaccinologia dell'mRNA, è importante spiegare l'importanza di incorporare molecole di mRNA nei genomi umani. Il campo scientifico che si occupa dell'incorporazione di molecole di mRNA nei genomi è chiamato biologia della retroposizione.
Le molecole di RNA hanno lo spettro più diversificato di funzioni nella cellula. Sono creati trascrivendo le informazioni genetiche dai nostri geni. Tuttavia, ogni gene produce almeno una o più molecole di mRNA mediante trascrizione e successiva elaborazione.
Quindi, c'è un gran numero di diverse molecole di mRNA nativo nella cellula che chiamiamo collettivamente la trascrizione. Una singola molecola di mRNA può avere ruoli regolatori diretti nella cellula o può trasportare istruzioni per la sintesi proteica sui ribosomi. Senza le nostre molecole di mRNA, o il nostro trascrittoma, le cellule non sarebbero in grado di funzionare.
Fin dall'inizio della follia COVID, era chiaro che molti nello spazio dei media quando parlano di vaccini mRNA non sanno di cosa stanno parlando. Con mia grande sorpresa, ho anche notato che alcuni colleghi esposti ai media non conoscono abbastanza le basi della biologia molecolare, della genetica umana e della biologia evolutiva.
Secondo quanto affermano, non sembrano sapere che l'informazione genetica scorre in due direzioni. La prima direzione va dal genoma al trascritto, mentre la seconda è l'inverso e va dal trascritto al genoma. In altre parole, l'informazione genetica viene trasferita dalle molecole di DNA alle molecole di RNA, ma anche dalle molecole di RNA alle molecole di DNA. Infatti, dal punto di vista evolutivo, il flusso iniziale di informazioni genetiche va dalle molecole di RNA alle molecole di DNA.
Non conoscendo queste basi della biologia molecolare e della genetica, si può facilmente entrare, consciamente o inconsciamente, nella pseudoscienza. E il fatto è che è nelle cellule umane che le molecole di mRNA sono spesso incorporate nel nostro genoma.
Ci sono circa 8.000 molecole di mRNA incorporate nei nostri genomi che la specie umana ha accumulato nel tempo e, oltre a ciò, ognuno di noi ha molecole di mRNA incorporate specifiche e diverse dalle altre persone. Numeri così grandi rivelano che l'incorporazione di molecole di mRNA è un processo mutageno molto importante. Inoltre, molto spesso l'incorporazione ereditaria di molecole di mRNA nel genoma comporta conseguenze fenotipiche molto gravi per gli individui.
È importante distinguere che le nostre molecole di mRNA possono essere incorporate nei nostri genomi, ma anche molecole di mRNA estranee da altri organismi. Le nostre stazioni stanno combattendo contro entrambe le installazioni. Questa lotta si basa sul tentativo di controllare i processi cellulari e genetici responsabili dell'incorporazione delle molecole di mRNA.
Il meccanismo di incorporazione delle molecole di mRNA nell'uomo è ben noto e si basa su elementi L1. Gli elementi L1 sono retrotrasposoni, cioè geni endoparassitari egoisti che cercano di moltiplicarsi nel genoma.
Ci sono circa 500.000 copie di elementi L1 nel genoma umano, o fino al 17% del nostro DNA è costituito da elementi L1. Gli elementi L1 si copiano attraverso un processo che chiamiamo trascrizione inversa.
In breve, la trascrizione dal genoma produce prima la molecola di mRNA dell'elemento L1, che traduce la molecola di mRNA L1 sui ribosomi in due tipi di proteine (ORF1p e ORF2p). Entrambe le proteine appena formate sono fisicamente legate alla molecola di mRNA L1 o ad un'altra molecola di mRNA.
Questo complesso di proteine e molecola di mRNA raggiunge quindi il nostro genoma e mediante un complesso processo di trascrizione inversa la molecola di mRNA viene trascritta nel DNA e incorporata nel genoma. Il sito di impianto è in linea di principio casuale, il che significa che diverse parti del genoma possono essere interessate dall'impianto.
La proteina ORF2p è una trascrittasi inversa e l'intero processo di retroposizione dell'elemento L1 dipende da essa. Nel citoplasma, ORF2p si lega a un'estremità di una molecola di mRNA chiamata coda poli-A.
Questa dipendenza dalla coda poli-A porta al fatto che l'intero processo non è specifico, quindi la proteina ORF2p può, oltre alla propria molecola di mRNA L1, catturare e incorporare nel genoma qualsiasi altra molecola di mRNA. Tale legame non specifico è dovuto al fatto che quasi tutte le molecole di mRNA hanno una coda di poli-A o una lunga stringa di adenina all'estremità 3 .
Al fine di prevenire tali eventi mutazionali dall'incorporazione di molecole di mRNA nel genoma, le nostre cellule cercano di silenziare l'attività dell'elemento L1 attraverso vari processi. Le cellule riescono solo parzialmente in questo, quindi c'è un sottile equilibrio tra gli interessi delle nostre cellule e gli interessi dell'elemento L1.
Sebbene l'incorporazione delle nostre molecole di mRNA sia un evento mutageno, l'incorporazione di molecole di mRNA estranee è ancora più pericolosa. È importante capire che il nostro corpo utilizza una gamma molto più ampia di difese per prevenire l'incorporazione di molecole di mRNA estranee, rispetto alla difesa contro le nostre molecole di mRNA.
Le nostre cellule non vogliono affatto che alcun mRNA estraneo entri in esse. Per questo motivo il nostro corpo è pieno di RNA, ovvero enzimi che distruggono le molecole di mRNA. Questi enzimi si trovano sulle superfici del nostro corpo, negli spazi intercellulari e nelle cellule stesse.
Se si verifica una rottura dell'mRNA estraneo nel citoplasma delle nostre cellule, i sensori cellulari rilevano la presenza di molecole di mRNA estranee e bloccano i processi cellulari comuni che potrebbero aiutare a riprogrammare l' mRNA estraneo e ad integrarsi nel nostro genoma .
Questa difesa multipla contro molecole di mRNA estranee è molto efficace in modo che le molecole di mRNA di altri organismi vengano incorporate meno frequentemente degli mRNA nativi nel genoma umano. Lo stesso vale per i genomi di altri organismi eucarioti. Di solito diciamo che gli organismi eucarioti si difendono dal trasferimento genico orizzontale .
È importante sottolineare che la biologia della retroposizione non è un campo scientifico poco conosciuto. Al contrario, i retrotrasposoni L1 e la retroposizione dell'mRNA sono stati studiati per oltre 40 anni . Un numero enorme di articoli scientifici è stato pubblicato su questo argomento nelle migliori riviste scientifiche, e la retroposizione è quella di riconoscere un problema biomedico soprattutto nella genetica dei tumori. Puoi trovare tutti i dettagli nel mio documento che è pubblicamente disponibile sul server di prestampa di OSF.
È interessante notare che i trasposoni, o geni che saltano, furono scoperti da Barbara McClintock nel 1950. La sua scoperta fu inizialmente accolta con grande diffidenza e persino ridicolo, ma molto più tardi NN la ricevette per quella scoperta.
E ora che abbiamo coperto la biologia della retroposizione, torniamo alla vaccinologia dell'mRNA. La vaccinologia dell'mRNA ha iniziato il suo sviluppo circa 30 anni fa. Tuttavia, per una ragione del tutto poco chiara, i ricercatori della vaccinologia dell'mRNA non sono consapevoli o ignorano deliberatamente che le molecole di mRNA sono incorporate nel genoma. In effetti, la vaccinologia dell'mRNA afferma esplicitamente che le molecole di mRNA non possono essere incorporate nel genoma .
All'inizio pensavo, come ho detto prima, che i ricercatori della vaccinologia dell'mRNA prendessero molecole di mRNA dai vaccini e le testassero specificamente per l'incorporazione nei genomi. O in alternativa, che hanno ingegnerizzato geneticamente tali molecole di mRNA che non hanno la capacità di essere incorporate nei genomi.
Tuttavia, con mia totale sorpresa, uno studio molto dettagliato della letteratura sui vaccini mRNA, dei documenti dell'OMS e dei documenti normativi ha rivelato che le molecole di mRNA dei vaccini non sono mai, in nessuna forma e in nessuna circostanza, state testate per l'incorporazione del genoma. In seguito ho trovato articoli scientifici in cui altri ricercatori, seppur indirettamente, hanno notato la stessa cosa. Hai tutti questi dettagli nel mio lavoro.
Per ribadire: la vaccinologia dell'mRNA non ha mai testato se le molecole di mRNA dei vaccini siano incorporate nei genomi. Inoltre, aderiscono esplicitamente all'idea pseudo-scientifica che le molecole di mRNA non possono essere incorporate nei genomi . Per ignoranza o intenzionalmente, non menzionano mai nei loro articoli elementi L1, trascrizione inversa L1, retrocopie e meccanismi di riposizionamento.
In sintesi, la vaccinologia dell'mRNA non conosce o ignora deliberatamente 40 anni di progressi nella genetica umana, nella biologia molecolare e nell'evoluzione. Tutto questo insieme mostra che la vaccinologia dell'mRNA promuove insegnamenti anti-evoluzionisti ed è per sua natura una pseudoscienza.
In questi giorni, abbiamo sentito scienziati spinti dai media dichiarare improvvisamente che "non ci sono prove che le molecole di mRNA dei vaccini siano incorporate nel genoma". Tali affermazioni sono un'inversione diabolica e una nuova menzogna con cui cercano di trarre ispirazione dal fatto che i vaccini a mRNA non sono mai stati testati per l'incorporazione nei genomi, sebbene ciò avrebbe dovuto essere fatto. Questi scienziati, insieme all'intera vaccinologia dell'mRNA, hanno finora affermato con insistenza falsità che le molecole di mRNA non sono incorporate nei genomi.
Ma il mio lavoro e altri articoli scientifici che sono stati pubblicati sempre più recentemente rivelano queste intenzioni di nascondere e nascondere prove relative alla sicurezza dei vaccini mRNA .
Pertanto, la vaccinologia dell'mRNA si basa sull'affermazione falsa e pseudo-scientifica che le molecole di mRNA non possono essere incorporate nel genoma. Ma la domanda è: a cosa serve questa assurdità? Cosa si doveva nascondere o ottenere con questa falsità? L'analisi mostra facilmente che questa è una menzogna centrale su cui si basa l'intera narrativa pseudo-scientifica occulta attorno al vaccino contro l'mRNA del COVID.
In primo luogo, la falsità che le molecole di mRNA non possono essere incorporate nel genoma è servita bene a coprire il fatto che i vaccini a mRNA sono in realtà vaccini genetici o terapia genica . Questi termini sono usati nella letteratura scientifica dalla stessa vaccinologia dell'mRNA, ma sono stati buttati fuori dalle narrazioni nello spazio pubblico e dei media sulle ali della falsità che le molecole di mRNA non possono essere incorporate nel genoma.
In secondo luogo, l'idea sbagliata che le molecole di mRNA in genere non possano essere incorporate nel genoma è servita come scusa per non condurre studi sulla possibile incorporazione di mRNA dai vaccini, sebbene tali studi fossero necessari.
In terzo luogo, la falsità che le molecole di mRNA non possono essere incorporate nel genoma è servita come giustificazione per non condurre studi di genotossicità e cancerogenicità. I documenti dell'EMA (Agenzia europea per i medicinali) affermano esplicitamente che non sono stati condotti studi di genotossicità e cancerogenicità nella valutazione degli mRNA dei vaccini. Pertanto, si può concludere che tutti gli effetti correlati alla genotossicità e alla cancerogenicità dei vaccini mRNA sono possibili. Tuttavia, nei media e nello spazio pubblico, questi fatti sono stati ignorati.
Nella mia ricerca, volevo valutare i rischi di incorporare vaccini mRNA nei genomi in base alle loro sequenze nucleotidiche. Tuttavia, il primo problema sorge già qui, poiché era insolitamente difficile ottenere sequenze nucleotidiche dai vaccini mRNA. In effetti, sono stato in grado di trovare solo la sequenza del vaccino mRNA di Pfizer e ho scoperto che la sequenza nucleotidica del vaccino mRNA di Modern non è mai stata resa pubblica.
È molto importante notare che le molecole di mRNA sono molecole di informazione che consistono in una serie di caratteri in un dato alfabeto e che in linea di principio possono codificare qualsiasi tipo di informazione. In traduzione, ciò significa che le persone vaccinate con il vaccino moderno ricevono un messaggio genetico non dichiarato nel loro corpo .
Se osserviamo più da vicino la sequenza dell'mRNA di Pfizer, notiamo subito che ha una coda di poli-A all'estremità 3 , che indica immediatamente che è visibile agli elementi L1 e che i presupposti di base per la sua incorporazione nel genoma sono state soddisfatte.
Per valutare ulteriormente la probabilità di incorporazione, ho confrontato l'mRNA di Pfizer con le nostre molecole di mRNA che sappiamo essere state incorporate nel genoma di alcune persone. Questi punti blu che vedete rappresentano molecole di mRNA che sappiamo per certo sono state incorporate nei genomi.
Ora puoi vedere la portata delle falsità nella vaccinologia dell'mRNA. La domanda è se sia davvero possibile che non lo sappiano o stiano solo fingendo di non sapere che tutto questo esiste. In ogni caso, la situazione è tragica e indica che l'intero campo della vacinologia mRNA è una pseudoscienza anti-evolutiva.
Vediamo anche che l'mRNA di Pfizer, che è contrassegnato da un triangolo rosso, interferisce con la distribuzione dei parametri di base delle sequenze nucleotidiche che già sappiamo essere incorporate nel genoma. Ciò conferma ulteriormente che è del tutto possibile che l'mRNA del vaccino Pfizer venga incorporato nel genoma. Puoi trovare tutti i dettagli aggiuntivi nel mio lavoro e il link al lavoro è mostrato nel video.
E ora veniamo alla parte più drammatica che ho scoperto. L'mRNA del vaccino Pfizer è una molecola sintetica che è stata ingegnerizzata geneticamente e ha una serie di proprietà uniche. Tutti questi tratti hanno una cosa in comune, ed è che aumentano la probabilità di incorporazione nei nostri genomi. Indicherò alcuni di questi interventi ingegneristici.
L'esistenza di una coda di poli-A nella molecola dell'mRNA di Pfizer è già stata menzionata e abbiamo detto che l'incorporazione nel genoma tramite elementi L1 dipende dall'esistenza di quella coda di poli-A. Oltre alla coda di poli-A, la molecola di mRNA di Pfizer imita l'architettura delle nostre molecole di mRNA, il che significa automaticamente una maggiore probabilità di incorporazione.
Una modifica estremamente significativa nella molecola dell'mRNA di Pfizer è la sostituzione delle basi nucleotidiche in cui l'uracile è sostituito da pseudouracile metilato. Lo pseudouracile metilato non si trova naturalmente nelle molecole di mRNA , rendendo l'mRNA di Pfizer invisibile ai nostri sensori cellulari incaricati di rilevare e prevenire l'incorporazione di molecole di mRNA estranee nel nostro genoma.
Pertanto, questa modifica ingegneristica rompe intenzionalmente le nostre difese naturali contro il trasferimento genico orizzontale e aumenta notevolmente la probabilità di incorporazione dell'mRNA di Pfizer nel nostro genoma.
Inoltre, una serie di diversi cambiamenti ha portato anche la molecola di mRNA di Pfizer ad avere un'emivita molto più lunga rispetto alle nostre molecole di mRNA naturali. Questo, ovviamente, aumenta ulteriormente la probabilità di incorporazione della molecola dell'mRNA di Pfizer nel nostro genoma.
La probabilità di incorporare molecole di mRNA dai vaccini dipenderà anche dalla loro dose iniziale, che posso tranquillamente dire è enorme . Si può calcolare che la quantità di molecole di mRNA in una singola dose di Pfizer o del moderno vaccino contro il COVID è tale da poter riprogrammare ogni cellula del nostro corpo che ha un nucleo .
Se osserviamo le nanoparticelle lipidiche che trasportano molecole di mRNA dai vaccini distribuite virtualmente in tutto il corpo, allora è chiaro che la probabilità di incorporazione nei nostri genomi è ulteriormente aumentata dall'enorme dose e dall'ampia distribuzione delle molecole di mRNA in tutto il corpo.
Un altro aspetto molto importante, che influisce sulla probabilità che le molecole di mRNA vengano incorporate nei vaccini nei nostri genomi, è il numero di dosi ricevute. Con ogni dose successiva ricevuta, la probabilità di incorporazione nei nostri genomi aumenta ulteriormente.
E infine, forse il punto più importante è che la probabilità di incorporazione di molecole di mRNA dai vaccini dipende dalle divisioni cellulari . Maggiore è la frequenza delle divisioni cellulari nel corpo, maggiore è la probabilità di incorporazione di molecole di mRNA sintetizzate artificialmente dal vaccino. Non è difficile distinguere che a causa di questo aspetto la probabilità di impianto di mRNA nei giovani, nelle donne in gravidanza, nei neonati e nei nascituri sarà ulteriormente aumentata.
Sicuramente è già chiaro per te che questi dati sollevano una domanda logica: i vaccini COVID mRNA sono effettivamente progettati intenzionalmente per l'incorporazione nei nostri genomi? Tutti i dati indicano che questa possibilità non può essere esclusa.
Di conseguenza, sorge la domanda se i vaccini mRNA siano il risultato della ricerca e dello sviluppo dei cosiddetti. duplice scopo? Cioè, le armi biologiche si sono effettivamente sviluppate con il pretesto dello sviluppo di vaccini?
D'altra parte, l'analisi evolutiva nel documento, che ho fatto usando il mio metodo di filostratigrafia genomica , mostra che è possibile andare nella direzione dello sviluppo di vaccini mRNA resistenti all'incorporazione genomica. Quindi è possibile un approccio ingegneristico diverso e più sicuro nello sviluppo di vaccini mRNA, quindi sorge la domanda perché non è andata in quel modo?
Tuttavia, è chiaro che esiste un meccanismo molecolare attraverso il quale le molecole di mRNA dei vaccini possono essere incorporate nei nostri genomi. Tuttavia, è altamente indicativo che la mutagenesi inserzionale - cioè la capacità di incorporare molecole di mRNA dai vaccini nel genoma - non sia mai stata testata, anche se avrebbe dovuto essere fatta. Ho spiegato prima che questo difetto di sicurezza è stato creato sulle ali della falsità che le molecole di mRNA generalmente non possono essere incorporate nei genomi.
Ora pongo alcune domande importanti:
Finalmente qualcuno indipendente che ha accesso ai vaccini mRNA per scopi di ricerca farà gli esperimenti necessari per testare finalmente l'incorporazione, la genotossicità e la cancerogenicità dei vaccini mRNA?
Perché non è stato fatto finora?
Chi sarà responsabile se vengono confermati ragionevoli dubbi sulla sicurezza del vaccino mRNA?
E infine. Perché le persone vengono persuase, ricattate e costrette a ricevere tali vaccini a mRNA non testati?
Infine, siamo tutti interessati ai possibili effetti dell'incorporazione di molecole di mRNA dai vaccini nei genomi umani. A causa del fatto che il sito di incorporazione delle molecole di mRNA nel genoma è per lo più un processo casuale, la gamma dei possibili effetti sul nostro corpo è molto ampia. Dato che l'uso dei vaccini mRNA è globale e colpisce la maggior parte degli individui nella popolazione, ci si può aspettare che l'intera gamma di possibili eventi avversi prima o poi diventi visibile.
Prenderemo in considerazione due scenari molto brutti. Prima di arrivare a loro devo spiegare che i nostri organismi sono costituiti da due tipi di cellule fondamentali. Le prime sono le cellule germinali, che includono le cellule germinali, che consentono il trasferimento genico verticale alla generazione successiva. Altre sono tutte le altre cellule che compongono il nostro corpo e le chiamiamo cellule somatiche.
Gli effetti dell'incorporazione di molecole di mRNA dai vaccini nei nostri genomi dipenderanno dal fatto che le molecole di mRNA dei vaccini siano state incorporate nella linea germinale, nel somatico o in entrambi i tipi di cellule.
Se l'impianto si è verificato nelle cellule germinali, una tale mutazione può portare a malattie ereditarie nella più ampia gamma di parole. Di quale malattia stiamo parlando dipenderà da quale delle nostre parti importanti del genoma viene inattivata dall'incorporazione della molecola di mRNA. È importante sottolineare che tale mutazione viene poi trasmessa alla prole nella popolazione.
Se invece l'impianto è avvenuto nelle cellule somatiche, e soprattutto nelle cellule staminali e precancerose, allora tale mutazione può portare allo sviluppo di una varietà di malattie tumorali.
In conclusione, ripeto alcune cose:
I vaccini a mRNA per il COVID19 si basano sulla falsità che le molecole di mRNA non sono incorporate nei genomi.
I produttori non hanno mai testato la possibilità di incorporare molecole di mRNA dai vaccini nei genomi e i regolatori non l'hanno mai chiesto, anche se avrebbero dovuto.
I documenti dell'agenzia di regolamentazione affermano chiaramente che la genotossicità e la cancerogenicità delle molecole di mRNA dei vaccini non sono mai state testate.
Per tutte le caratteristiche, le molecole di mRNA dei vaccini possono essere integrate nei genomi.
Tutte le soluzioni ingegneristiche applicate indicano che le molecole di mRNA dei vaccini, consciamente o inconsciamente, sono progettate per essere incorporate nei genomi il più facilmente possibile.
La possibile integrazione di molecole di mRNA dai vaccini nei genomi può causare tumori e malattie genetiche ereditarie.
Sulla base di tutto quanto sopra, è del tutto possibile che i vaccini a mRNA avranno effetti dannosi sulla popolazione e gli effetti più dannosi su donne in gravidanza, bambini e adolescenti.
Infine pongo la domanda:
Per quale scopo sono stati realizzati i vaccini a mRNA per il COVID19?
Sono convinto che, dopo questa mia presentazione, tu possa trovare da solo la risposta a questa domanda.
Ancora una volta, noto che tutte le informazioni aggiuntive possono essere trovate nel mio lavoro.
Alla prossima telefonata vi saluto tutti.
Grazie per l'attenzione e la pazienza. Qui lo studio tradotto per chi vuole leggerlo
Astratti e Figure
Il principale vantaggio dei vaccini mRNA rispetto agli approcci più convenzionali è il loro potenziale di rapido sviluppo e distribuzione su larga scala in situazioni di pandemia. Nell'attuale crisi COVID-19, i due vaccini mRNA COVID-19 sono stati approvati condizionatamente e ampiamente applicati, mentre altri sono ancora in fase di sperimentazione clinica. Tuttavia, non ci sono precedenti esperienze con l'uso di vaccini mRNA su larga scala nella popolazione generale. Ciò garantisce un'attenta valutazione delle proprietà di sicurezza del vaccino mRNA considerando tutte le conoscenze disponibili sulla biologia molecolare e l'evoluzione dell'mRNA. Qui, discuto l'affermazione pervasiva che i vaccini a base di mRNA non possono alterare i genomi. Sorprendentemente, questa nozione è ampiamente affermata nella letteratura sui vaccini mRNA, ma non è mai supportata dal riferimento a documenti scientifici primari che affrontino specificamente questa domanda. Questa discrepanza diventa ancora più sconcertante se si considerano lavori precedenti sugli aspetti molecolari ed evolutivi della retroposizione nelle popolazioni murine e umane che documentano chiaramente la frequente integrazione di molecole di mRNA nei genomi, inclusi i contesti clinici. Eseguendo confronti di base, ho dimostrato che le caratteristiche della sequenza dei vaccini mRNA soddisfano tutti i requisiti noti per la retroposizione da parte degli elementi L1, i più abbondanti retrotrasposoni autonomamente attivi nel genoma umano. Al contrario, ho trovato un pregiudizio evolutivo nell'insieme dei geni noti che generano la retrocopia, un modello che potrebbe aiutare nel futuro sviluppo di mRNA terapeutici resistenti alla retroposizione. Concludo che è infondato assumere a priori che le terapie a base di mRNA non abbiano un impatto sui genomi, e che il percorso verso l'integrazione del genoma degli mRNA del vaccino tramite retroelementi endogeni L1 è facilmente concepibile. Ciò implica che abbiamo urgente bisogno di studi sperimentali che testino rigorosamente la potenziale retroposizione degli mRNA dei vaccini. Al momento, la sicurezza della mutagenesi inserzionale dei vaccini a base di mRNA dovrebbe essere considerata irrisolta.
Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
prestampa è il autore. Il preprint è fatto disponibile sotto a CC - Per attribuzione4.0 Internazionale licenza. Citazione:Domazet - Lo š o,
Tomislav. 2021. mRNAVaccini: Perché i sla b iology dir etroposizione ho ignorato?Preprint OSF. luglio24. doi:10.31219/osf.io/uwx32
1
Vaccini mRNA: perché la biologia della retroposizione viene ignorata?
1
2
Tomislav Domazet-Lošo 1,2*
3
4
1 Laboratorio di Genetica Evolutiva, Divisione di Biologia Molecolare, Ruđer Bošković
5
Istituto, Bijenička cesta 54, HR-10000 Zagabria, Croazia
6
7
2 Facoltà di Medicina, Università Cattolica della Croazia, Ilica 242, HR-10000 Zagabria, Croazia.
Il maggiore vantaggio di mRNA vaccini terminato Di più convenzionale si avvicina è i loro
13
potenziale per rapido sviluppo e su larga scala distribuzione in pandemia situazioni. In
14
l'attuale COVID-19 crisi i due vaccini mRNA COVID-19 sono stati condizionati
15
approvato e a grandi linee applicato, mentre altri sono ancora dentro clinico prove. Però,là è
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no precedente Esperienza insieme a l'utilizzo di vaccini mRNA Su il grande scala in generale
17
popolazione. Questo mandati un attento valutazione di mRNA vaccino sicurezza proprietà di
18
considerando tutto a disposizione conoscenza su l'mRNA molecolare biologia e Evoluzione. Qui,
19
io discutere il pervasivo reclamo Quello a base di mRNA vaccini non può alterare genomi.
20
Sorprendentemente, questo nozione è ampiamente affermato nel vaccino mRNA letteratura, ma mai
21
supportato di riferimento a qualsiasi primario scientifico documenti Quello voluto nello specifico indirizzo
22
questo domanda. Questo incongruenza diventa anche Di più sconcertante Se uno considera precedente
23
lavorare su il molecolare ed evolutivo aspetti di retroposizione in murino e umano
24
popolazioni Quello chiaramente documenti il frequente integrazione di mRNA molecole in
25
genomi, tra cui contesti clinici. Diesecuzione di base confronti, io ha mostrato che il
26
caratteristiche della sequenza di vaccini mRNA incontrare tutto noto requisiti per retroposizione di
27
elementi L1 - il maggior parte abbondante in autonomia retrotrasposoni attivi in l'umano
28
genoma. Incontrasto, io trovato un pregiudizio evolutivo nel set di retrocopia nota
29
generare geni — uno schema che potrebbe aiuto nel futuro sviluppo della retroposizione-
30
mRNA terapeutici resistenti. Concludo che è infondato a priori assumereQuello
31
terapie a base di mRNA fare non genomi di impatto, e che il rotta al genoma
32
integrazione di vaccino mRNA attraverso endogeno Retroelementi L1 è facilmente concepibile.
33
Ciò implica che noi bisogno urgente studi sperimentali che avrebbe testare rigorosamente per il
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Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
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potenziale retroposizione degli mRNA del vaccino. Allo stato attuale, la sicurezza della mutagenesi inserzionale
35
di vaccini a base di mRNA dovrebbe essere considerato irrisolto.
36
37
introduzione
38
La ricerca e lo sviluppo di Le terapie a base di mRNA hanno guadagnato slancio con l'inizio
39
del COVID-19 pandemie. Attualmente i duevaccini mRNA contro SARS-CoV-2
40
(BioNTech/Pfizer BNT162b2 e Moderna mRNA-1273) hanno stato approvato per l'uso in
41
popolazione generale in molti paesi (ad es. 1,2),e molti altri sono in fase di sviluppo (3–
42
5). Esso hastato spesso suggerito che il principale vantaggio di mRNA-based vaccini, rispetto a
43
il più convenzionale si avvicina, è ilpossibilità di il loro rapido sviluppo e su larga scala
44
distribuzione (6,7), che sono entrambi auspicabile proprietà in pandemia situazioni. La dichiarazione
45
Quello vaccino mRNA fare non posa il rischio per genoma integrazione (per esempio 6,8–12), e
46
di conseguenza che là è no inserzionale rischio di mutagenesi, è un altro comunemente elencato
47
vantaggio dei vaccini a base di mRNA, in particolare se confrontato con il profilo di sicurezza di DNA -
48
terapie basate (10,12,13). Questa affermazione mi ha spinto a guardare più attentamentenell'mRNA
49
vaccino letteratura a trova un fondamento logico per esso .Sorprendentemente, ero non capace di traccia giù qualsiasi
50
sperimentale o s teoricotudy che nello specifico indirizzo esil possibilità di genoma
51
integrazione di terapie mRNA.
52
53
Questo carenza di pertinente studi è riflesso in numerose recensioni (4–6,9,10,14–18), prenotare
54
capitoli su i vaccini mRNA (13,19-22) e documenti di organizzazioni internazionali (23–
55
25) quale spesso st ha mangiatoQuello mRNA vaccini fare non posa il rischio per genoma integrazione, ma
56
manca citare eventuali riferimenti a sostegno di questa idea. Occasionalmente, alcune citazioni sono incorporate
57
(es. 15,22,26,27), ma sfortunatamente sono circolari in quanto indicano il simile non supportato
58
dichiarazioni (6,10,21,28-30). Questosegnala che il idea di vaccino resistenza degli mRNA a genoma
59
l'integrazione si comporta come un meme chesi autoreplica in la letteratura, e pertanto essa dovrebbenon
60
essere considerato affidabile scientifico informazione. indubbiamente, là è sempre un possibilità Quello
61
mio ricerca di letteratura perse alcuni importanti lavoro, comunque altri ricercatori notare anche,
62
anche se senza andare nei dettagli, la carenza di studi che esplicitamente affrontare il
63
possibilità di integrazione del genoma dell'mRNA del vaccino (13,31-34).
64
65
Oltre al lack di referenze, l'argomentazione linea per il affermare che il genoma integrazione
66
di vaccino mRNA molecole non è possibile, o è trascurabile,è piuttosto limitato inil vasto
67
maggioranza di carte. Molti di loro semplicemente affermare Quello vaccino mRNA non può integrarsi in il
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prestampa è il autore. Il preprint è fatto disponibile sotto a CC - Per attribuzione4.0 Internazionale licenza. Citazione:Domazet - Lo š o,
Tomislav. 2021. mRNAVaccini: Perché i sla b iology dir etroposizione ho ignorato?Preprint OSF. luglio24. doi:10.31219/osf.io/uwx32
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genoma ospite senza spiegando perché questo non è possibile (3,10,12,19–22,26,30). Altri a breve
69
descrivere che gli mRNA del vaccino rimangono nel citoplasma di le cellule ospiti — in contrasto con il DNA-
70
vaccini basati che deve entrare il nucleo a essere efficace — e così fai non avere il
71
possibilità di modificare il genoma (4,9,18,27,35).
72
73
Recentemente, alcuni documenti litigare Quello il relativamente breve persistenza di mRNA fare genoma
74
integrazione di vaccini mRNA improbabile (4,13,27). Però,un po 'di loro riconoscere anche
75
la possibilità del genoma integrazione se l'mRNA del vaccino è retrotrascritto nell'host cellule
76
(4,13,31). Come un possibile fonte di enzimi per inversione trascrizione e genoma integrazione
77
endogeno umano retrovirus (HERV) e retrovirale infezioni (es HIV) sono menzionato,
78
con conclusione che il rischio di integrazione è ancoraaltamente improbabiley (4,31). In contrasto, alcuni autori
79
sono Di più cauto e suggerire Quello indagine Maggio essere necessario a chiarire se vaccino
80
L'integrazione dell'mRNA può avvenire (13).
81
82
La biologia della retroposizione
83
Tuttavia, questa discussione entro la vaccinologia campo attivo il vaccino genoma mRNA
84
rischi di integrazione è piuttosto brevee sorprendentemente incompleto in quanto non considera il
85
conoscenza accumulata sulla biologia di retroposizione (36-40). In moltieucarioti il
86
mRNA cellulari di vari geni sono endogeno retrotrascritto e reintegrato in
87
il genoma cedendo il loro retrocopie (fig. 1b) (36,38–40). Questoprocesso di mediata da mRNA
88
gene la duplicazione èaltamente frequente in therian mammiferi (41), ed èmigliore studiato in primati
89
e topi(36-38,40). Dinotare la termine retrocopia è spesso scambiato con Altro termini correlati
90
come pseudogeni elaborati, pseudogeni retrotrasposti, retropseudogeni, retroposti gene
91
copie, retroCNV, e retrogeni, come la terminologia relativo alla retroposizione non èeppure completamente
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risolto (38,39).
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Figura 1. L1-mediato retroposizione. A) Retroposizioneciclo di L1 elementi. Un attivo L1
95
l'elemento è trascritto in il nucleo e risultante L1 mRNA è trasportato al citoplasma
96
dove subisce traduzione (42,43). Codici mRNA L1 per ORF1 e proteine ORF2 quale
97
associarsi preferenzialmente con l'mRNA L1 ( cis -preferenza) per formare la particella ribonucleoproteica L1
98
(L1 PNR) (42-44). ORF1p è un proteina legante l'RNA con attività di accompagnatore, mentre ORF2p
99
funziona come inversione trascrittasi e endonucleasi (45,46). Diun ancora irrisolto meccanismo
100
L1 RNP, che contiene almeno L1 mRNA e ORF2p, entra nel nucleo. Nel nucleo, L1
101
mRNA è retrotrascritto e integrato in il genoma dal processo di bersaglio-innescato
102
trascrizione inversa (TPRT) (43,45–47). Il meccanismo di retroposizionesm fa affidamento su il legame di
103
ORF2p a il L1 mRNA poli- A coda(46,48-50). Làè un po' prova che il le cellule potrebbero
104
captazione di vescicole extracellulari (EV) contenenti L1 mRNA che può dire sottoporsi a traduzione
105
e retroposizione (51). B)L1 -mediata retroposizione dicodifica delle proteine geni. un genitore
106
proteina gene codificante è trascritto in il nucleo. Il risultato pre-mRNA è elaborato e
107
maturo parentale gene mRNA è poi trasportato a il citoplasma. L1 proteine (ORF1p e
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5
ORF2p) interagire insieme a parentale gene mRNA di il processi chiamato trans- associazionea modulo
109
parentale gene particella ribonucleoproteica (gene parentale RNP) (36,43,44,47). Simile a L1
110
RNP, gene parentale RNP entra nel nucleo dove tramite il processo TPRT gene parentale mRNA
111
viene retrotrascritta e integrata nel genoma. Th e poli-Una coda di genitori mRNA gene
112
gioca il ruolo cruciale in questo processo (36,48-50). C )Ipotetica retroposizione mediata da L1 di
113
vaccino mRNA. Vaccino mRNA formulato in lipidi nanoparticelle (LNP) accedere il cellula di
114
endocitosi (1,2,6,10,52). UNfrazione di mRNA del vaccino entra nel citosol via endosomiale
115
fuga, il resto dell'mRNA del vaccino subisce la degradazione negli endosomi (52) o viene riconfezionato
116
in multivescicolare endosomi in vescicole extracellulari (EV) e secreto di nuovo nel
117
spazio extracellulare (53). Ilvicino o cellule lontane Potere vaccino di assorbimento mRNA da queste
118
veicoli elettrici(53,54). L1 proteine (ORF1p e ORF2p) interagire insieme a vaccino mRNA di il processi
119
chiamato trans- associazionea modulo vaccino mRNA ribonucleoproteina particella (vaccino mRNA
120
RNP) (36,43,44,47). come L1e RNP del gene parentale, mRNA RNP del vaccino entra il nucleo
121
dove di il Processo TPRT vaccino mRNA è inversione trascritto e integrato nel
122
genoma. La coda poli-A dell'mRNA del vaccino gioca un ruolo cruciale in questo processo (36,48-50).
123
124
A seconda della metodologia di annotazione, la stima numero di retrocopie nell'essere umano
125
genoma variare, ma il cifre in maggior parte studi girare in giro 8.000 (38,39,55,56), e queste
126
le retrocopie derivano da circa 2.500 geni parentali (55,57) — cioè geni i cui mRNA
127
sono retrotrascritti e integrati nel genoma (Fig. 1a, b). Questi valorisono ugualmente alti
128
in tutto proiettato mammiferi therian e riflettono la retroposizione endogena attività durante ~200 Mio
129
della loro evoluzione (41,57). Tuttavia, l'attività continua di retroposizione è ancheapparente in
130
esistente umano popolazioni dove sostanziale polimorfismo di romanzo retrocop ies èrivelato
131
(37,56,58-60). Peresempio, esso era stimato che un individuale porti in media seiromanzo
132
retrocopie che sono assente dal umano riferimento genoma, e quello queste retrocopie erano
133
derivato da il piscina di 503 genitore unico geni (37). Questevalori indicare a piuttosto alto
134
attività di retroposizione nelle attuali popolazioni umane.
135
136
Uno studio recente nei topi suggerisce che il tasso effettivo di generazione di retrocopia in esistente
137
la popolazione è ancora più alta e forse simile tra gli umani e topi (40), e quindi è
138
non sorprendente quella retrocopia variazione viene rilevato in medicina contesti (61,62). Però,è
139
anche suggerito Quello dovuto a l'utilizzo di analitica non ottimizzata molte condutture retrocop iesavere
140
spesso stato trascurato in la routine genetico test (40,61). In presente, lì sono parecchi
141
casi documentati di emergenza retrocopia imparentato alle malattie in animali (47,61,63), e uno
142
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Astuccio di patogeni retrocopia in umani (47,61,64,65), ma più potrebbe essere atteso essere
143
scoperto (40). In realtà, esso sembraQuello retrocopia variazione in umano popolazioni potrebbe essere
144
Di più fenotipicamente pertinente e specifico della popolazione di separare nucleotide polimorfismi
145
(37,40), e che la maggior parte di le retrocopie appena trasposte hanno un effetto deleterio impatto (40). Tutto
146
di questo suggerisce che il carico di mutazione proveniente dal attività di retroposizione nell'essere umano esistente
147
popolazioni è rilevante dal punto di vista medico.
148
149
Indipendentemente di l'iniziale selettivo epurazione (40), retrocopie sono il fonte di romanzo geni insieme a
150
adattivo significato che contribuire a biologia umana e Salute (36,39). In precedenza,
151
le retrocopie hanno stato visto come la non funzionale resti di fatturato evolutivo, chiamato
152
pseudogeni elaborati (39), principalmente perché si presumeva che le retrocopie intrinsecamente mancanza
153
elementi che guidano la trascrizione e così potrebbe non essere trascritto (39-41). un similediscussione
154
è recentemente cresciuto in il vaccinologia campo quando la possibilità di vaccino mRNA genoma
155
integrazione e il suo impatto sui fenotipi èdiscusso (13). Tuttavia, dopo che è stato realizzatoQuello
156
la maggior parte delle regioni di una il genoma dei mammiferi sonotrascritto (66-68), e che le retrocopie potrebbero
157
facilmenteguadagno i loro possedere normativo elementi (36,38,40,41), esso ha diventare apparente Quello maggior parte
158
le retrocopie mostrano segni di trascrizione (38,40,41).
159
160
Queste retrocopie trascritte sono quindi la fonte di innovazioni evolutive come potrebbero essere
161
ulteriormente trasformato in una nuova proteina codificanti o retrogeni dell'RNA (36,38,41,69). Circa
162
diverse centinaia di RNA e diverse centinaia retrogeni codificanti proteine sono stimati a Sii attivo
163
negli umani e topi (36,38). Per la maggior parte di loro funzionali significato ha ancora essere determinato,
164
ma alcuni sono conosciuto essere umano malattia geni (70,71) o a avere fenotipi distinguibili
165
(36,38).
166
167
Molti dei retrocopie I hanno discusso finora sono trasmessa verticalmente tramite la linea germinale,
168
ma mRNA anche retroposizione Si verifica tessuti somatici. retroposizione somatica è sostanzialmente
169
meno studiato, ma ciò è conosciuto per essere comune in tessuti cancerosi (58,72-75), e verificare durante
170
sviluppo precoce (64,65). Però,l'attività di endogeno retroelementi che unità
171
la retroduplicazione nell'uomo suggerisce che gli eventi di retroposizione di mRN A dovrebberoessere trovato in altro
172
somatico fazzoletti come bene(vedere sotto). Questoindica Quello retrocopie continuamente rimodellare il
173
genoma umano, non solo a la popolazione livello e più profondo tempo evolutivo scala, ma anche
174
in somatico fazzoletti durante individuale sviluppo. Esso è perciò importante a tener conto di il
175
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meccanismi endogeni di retroposizione nell'uomo quando la probabilità di integrazione genomica
176
dei vaccini mRNA viene valutato.
177
178
I meccanismi di formazione della retrocopia
179
Il meccanismo che conduce a la formazione di retrocopie in lignaggio umano è relativamente bene
180
studiato e comprende prevalentemente a lungo intervallati elemento-1 (fig. 1a) (LINEA-1 o L1)
181
retrotrasposoni (36,38,40,44,76), anche se c'è alcuni prove che retroposizione attraverso lungo
182
anche i retrotrasposoni a ripetizione terminale ( LTR ) sonopossibile (38,76). I retroelementi L1 sono circa 6
183
kb di lunghezza, costituiscono il 17% del genoma umano e circa uno centinaia di loro sono attivi in
184
diffondendo le loro copie nel genoma tramite di retroposizione di il proprio mRNA (figura 1a)
185
(42,43,47,77-80). Quando trascrittoL1 produce mRNA bicistronico che codici per due
186
proteine; ORF1pè un nlegame all'RNA proteine con accompagnatore attività, mentre Funzioni ORF2p
187
come inversione trascrittasi e endonucleasi (42,43,45–47,79,80). Insieme insieme a un L1 mRNA
188
queste proteine si assemblano nel citoplasma in aRibonucleoproteina L1 particella ( L1 RNP), che
189
può quindi entrare nel nucleo (Fig. 1a) (42,43,45–47,79,80).
190
191
Nel nucleo, L1 mRNA è alla fine retrotrascritto e integrato in il genoma a
192
A/T ricco obiettivo di consenso siti di il processo chiamato target-innescato trascrizione inversa
193
(TPRT) (figura 1a) (43,45-47). In il antisenso direzione L1 anche codici per ORF0p, un piccolo
194
peptide Quello localizza in il nucleo e migliora l'efficienza di retrotrasposizione (47,81).
195
Durante Ciclo di vita L1 vario proteine dell'ospite interagire con L1 RNP di promuovere o
196
sopprimendo il loro retrotrasposizione (47,82). proteina L1 macchinari preferenzialmente prende di mira i loro
197
codifica dell'mRNA ( cis -preferenza),ma si puòmobilitare anche avarietà di altri RNA presente in
198
il cellula ( trans- associazione)Compreso non autonomo mobile elementi (Alu, SVA),
199
RNA splicesomali e diversi mRNA codificanti proteine (Fig. 1b) (43,44,47,78,83).
200
201
Questo retroposizione rilassata comportamento di elementi L1 ,che permette mobilitazione di vario
202
mRNA tramite trans- associazione,è responsabile del massiccio accumulo di non
203
mobile autonomo elementi e retrocopie in genomi (Fig. 1b). Ildomanda sorge come
204
Gli elementi L1 raggiungono prestazioni così promiscue. La ragione di fondo di tale comportamento
205
è legato a la retroposizione L1 meccanismo che è subordinato a ORF2p vincolante per il poli-
206
Una coda durante RNP formazione nel citoplasma (Fig. 1) (48,49). Successivamentein il nucleo,
207
si basa anche sull'integrazione del genoma sulla coda della poli- Ache consente flessibilità nel DNA adescamento a
208
il obbiettivo posto durante il TPRT processi (46,50). Dato Quello poli-A code sono non specifico basso
209
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complessità sequenze che sono quasi onnipresente regalo a il 3' finisce di cellulare mRNA
210
(84), questo implica che in linea di principio ogni mRNA potrebbe essere un bersaglio del macchinario proteico L1 e
211
subiscono il processo TPRT (Fig. 1c).
212
213
in ogni caso, il completare la mancanza di retroposizione specificità voluto significativamente inferiore il fitness
214
di L1 elementi e compromesso i loro parassita proliferazione in il genomi. Perevitare questo
215
elementi scenario L1 è riuscito a mirare preferibilmente al loroproprio mRNA indipendentemente da poli-
216
Una dipendenza dalla coda (44,85,86). UNmodello popolare che cerca di spiegare i meccanismi di questo cis -
217
preferenza prevedono che durante la traduzione emerga Le proteine L1 si associano immediatamente al
218
ribosoma al loro mRNA codificante (42,45,48,87). Ovviamente,questo o un processo simile garantisce
219
l'equilibrio tra parassiti riproduzione di elementi L1 e la mobilitazione occasionale di
220
diversi mRNA per trans- associazione tramite tratti poli-A (Fig. 1).
221
222
Elementi L1 in linea germinale e soma
223
Il generale dinamica di L1 retroelements li fa contributori importanti alla genetica
224
variazione entro e tra individui insieme a implicazioni Su il Evoluzione e malattia in
225
umani (43,80,88). Interazionetra il genoma ospite ed elementi L1 è multistrato con
226
benefico e dannoso effetti Su il ospite fitness (88-93). Per questo Motivo, il ospite cellule
227
evoluto vari meccanismi a mantenere in bilancia i loro attività (88,91,94–99). Indipendentemente di
228
queste ospite protezione meccanismi, un nuovo retroposizione evento mediato di L1 elemen tsdovere
229
si verificano nella linea germinale per essere passati alla generazione successiva (92).
230
231
Il semplice presenza di numerose verticalmente ereditato L1 elementi, non autonomo mobile
232
elementi e retrocopie nei genomi umani fornisce una prova diretta che la loro mobilitazione
233
ripetutamente Si verifica la linea germinale (94). Esso ha anche stato ben consolidato che L1 attività
234
contribuisce al continuo mutagenesi germinale (100,101). Però,la dinamica precisa di
235
retroposizione durante ciclo di vita della linea germinale è meno chiaro (91,92,102,103). Ilattuale dati
236
suggerire che elementi L1 mostra espressione e retroposizione attività in prova es(91,100,101,104),
237
spermatozoi (105.106), ovaie (100,101), ovociti (107), e presto embrioni
238
(92,94,100,102,103,108).
239
240
Anche se erainizialmente pensavo che elementi L1 sono principalmente attivo nel linea germinale,
241
ac prove cumulato suggerisce che anchedovrebbe essere considerato un mutageno endogeno in
242
tessuti somatici (94,95,101,109). L1gli elementi sono espressi in diversi somatico umano fazzoletti
243
Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
prestampa è il autore. Il preprint è fatto disponibile sotto a CC - Per attribuzione4.0 Internazionale licenza. Citazione:Domazet - Lo š o,
Tomislav. 2021. mRNAVaccini: Perché i sla b iology dir etroposizione ho ignorato?Preprint OSF. luglio24. doi:10.31219/osf.io/uwx32
(110), piastrine, megacariociti e T cellule (93). Espressionee attività di retroposizione di L1
245
elementi era rilevato in vascolare cellule endoteliali come bene(104,111). Però, somatico L1
246
retroposizione avere stato ampiamente studiato soltanto in il cervello, cancro fazzoletti e il
247
tratto gastrointestinale (43,73).
248
249
Durante entrambi embrionale e adulto neurogenesi L1 l'attività di retroposizione genera significativo
250
neuronale mosaicismo (56,94,112–116) Quello ulteriore aumenta in neurologico disturbi
251
(116,117). L1 retroposizioneSi verifica diversi tipi di cellule del sistema nervoso centrale Compreso
252
cellule gliali, cellule progenitrici neuronali, neuroni differenzianti e neuroni maturi non in divisione
253
(113,116,118-121). Esso è ipotizzato Quello L1-guidato somatico mosaicismo Maggio alterare funzionale
254
proprietà di neurale cellule e Quello molti di loro Maggio contenere un unico genoma (113,121).
255
Tuttavia, il significato biologico e medico di questo mosaicismo non è del tutto chiaro (115-117).
256
257
L1elementi sono anchealtamente espresso in molti umano tumori, dove essi funzione come un
258
mutageno endogeno, e può Sii responsabile per mutazioni alla guida nella tumorigenesi (79,80).
259
Tumori epiteliali sembrano aessere particolarmente propenso a L1 retroposizione (43,73). È interessante notare che L1
260
gli inserimenti sono trovato nel tumore cellule così comecellule normali di fegato, stomaco, due punti e
261
esofago (122-125), suggerendo molto diffuso somatico attività di L1 elementi inil
262
gastrointestinale tratto. In generale, somatico L1 retroposizione è altamente ontogenesi dipendente e
263
aumenta fortemente con avanzato età a causa di L1 trascrizionale derepressione (99.126). In
264
dipendenza da regolazione endogena, l'attività di L1 elementi è sensibile a esogeno segnali
265
e potrebbe essere indotta da numerosi fattori ambientali (88,94,95,109,117). Presi insieme,
266
è Chiariscilo germinativo umano e molti le cellule somatiche hanno potenziale duraturo per L1 -
267
retroposizione mediata da cis -preference un d trans -Associazione (Fig. 1).
268
269
Vaccini mRNA e retroposizione
270
Evidentemente, vari mRNA negli esseri umani potrebbe essere al contrario trascritto e integrato nel genoma
271
tramite L1 retroelementi con negativo effetti su fitness. Però,questo sì non prontamente implica che
272
questo si verificherà a mRNA del vaccino. un derisposta finita verrà da esperimenti e
273
popolazione monitoraggio, ma per Ora esso è utile a tener conto di i loro descritto proprietà e
274
valutarli contro il Meccanismo di retroposizione L1 (Fig. 1). Il principio attivo di
275
BNT162b2 vaccino è un 4.284-nucleotide lungo sintetico mRNA molecola Quello contiene N1-
276
metilpseudouridina (m1Ψ), un modificato nucleoside che sostituti naturali uridina
277
Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
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Tomislav. 2021. mRNAVaccini: Perché i sla b iology dir etroposizione ho ignorato?Preprint OSF. luglio24. doi:10.31219/osf.io/uwx32
10
(1,127,128). Questola modificazione nucleosidica riduce risposta immunitaria innata a esogeno
278
molecole di mRNA e migliora la loro traduzione (6,129-131). Strutturalmente BNT162b2 mRNA
279
consiste in un analogo del cappuccio 5', un 5'regione non tradotta, un picco SARS-CoV-2 ottimizzato per codone
280
prote incodifica sequenza, un 3' non tradotto regione e un 110-nucleotide poli- Acoda
281
(1,52,127,128). Questi elementi strutturali seguono la consueta architettura dell'mRNA eucariotico e
282
aiutare aumentare l'RNA stabilità e traslazionale efficienza di mRNA vaccini (6,10,28,128).
283
A differenza di BNT162b2, l'esatta sequenza dell'mRNA del vaccino mRNA-1273 sembra non essere
284
divulgato pubblicamente (52). Tuttavia, il suo generaleil design è simile all'mRNA di BNT162b2 incluso
285
l'uso di m1Ψ al posto dell'uridina, il presenza di una struttura 5' cap, una regione 5' non tradotta,un
286
ottimizzato per codone arpione proteina codifica sequenza, un 3' non tradotto regione, e un poli- Acoda
287
(2,132).
288
289
A partire dal la prospettiva del loro sequenza disposizione BNT162b2 e mRNA-1273 mRNA
290
sintetico molecole apparire a essere adatto obiettivi per L1 retroposizione in transperché essi
291
imitano strutturalmente e funzionalmente l'architettura degli mRNA nativi che si verificano nel
292
citoplasma di eucariotico cellule (6,10). In questo considerare, probabilmente più importante sequenza
293
la caratteristica è loro poli- Una coda cheè noto essere richiesto per L1-mediato retroposizione (Fig. 1)
294
(49). Tuttavia, le informazioni disponibili sulla logica ingegneristica dell'mRNA del vaccino rivelano che
295
vaccino mRNA erano non nello specifico costruito a evitare catturare di il L1 retroposizione
296
macchinari (1,2,6,10,52). In effetti, sembra che nessuno studio inil campo del vaccino mRNA considerato
297
questa possibilità (es. 4,6,10,13,31). Ad esempio, la coda poli- Adi BNT162b2 mRNA contiene
298
una sequenza linker lunga 10 nucleotidi che è fiancheggiatada 30 e 70 nucleotidi di adenosina lunga
299
tratti (127). Tuttavia, questo poli-A modifica della coda, che aiuta in aumento traslazionale
300
efficienza (128,133), è improbabilea intaccare il retroposizione propensione di il vaccino mRNA
301
perché solo nucleotide cambia direttamente vicino al 3' fine del poli- A codasono conosciuti
302
aavere impatto significativo sul L1 meccanismo di retroposizione (49,50,97). Inoltre,non-
303
i nucleotidi di adenosina all'estremità 3' della coda di poli-A sono generalmente evitati nell'mRNA
304
terapeutici in quanto ostacolare l'efficienza traslazionale (134). Allo stesso modo, il m1Ψribonucleoside
305
modifica, perché di il totale numero di modificato nucleotidi per mRNA molecola, è
306
forse il più sorprendente caratteristica artificiale di il vaccino mRNA —tuttavia, questi tipi di
307
le modificazioni del ribonucleosidi generalmente non impediscono la trascrizione inversa (135).
308
309
Geni genitoriali e BNT162b2
310
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Nel comparativo contesto, geni conosciuti a attivamente generare retrocopie (parentale geni) in
311
esistente popolazioni (Fig. 1b) sono il migliore riferimento a valutare generale mRNA sequenza tendenze
312
imparentato a retroposizione. Però, il collettivo proprietà di parentale geni avere non stato
313
ampiamente analizzato. Alcuni studi riportano che i geni dei genitori si arricchiscono ditraduzione,
314
ribosoma, intracellulare lume e cellula divisione imparentato funzionale categorie (37,58,60), e
315
che hanno una debole tendenza essere altamente espresso (37), ma un più dettagliato l'analisi è ancora
316
mancante. Essoè utile allora da esplorare qui alcuni di base proprietà di sequenza di mRNA
317
trascritto da parentale geni conosciuti a generare attivamente retrocopie in esistenza popolazioni
318
(37,40), e poi a relazionare questo informazione a il vaccino mRNA sequenza Quello è pubblicamente
319
disponibile (es. BNT162b2).
320
321
Il corrente stima di 503 parentale geni in umani (37) è più basso che in i topi dove 1663
322
di loro sono recuperato (40). Però, il studio in i topi quale utilizzo un migliorato retrocopia
323
pipeline di rilevamento e sequenziamento più alto profondità, trova che il numero di geni parentali ha
324
non raggiunto la saturazione, così il effettivo numero di parentale geni dovrebbe essere atteso a essere
325
più alto, specialmente in umani (40). Indipendentemente di questo inerente incompletezza, il a disposizione
326
set di dati mostrati che entrambi topo e umano parentale i geni hanno all'estero distribuzione di mRNA
327
lunghezze (fig. 2a, b). è anche evidente che il mRNA dei genitori i geni tendono avere leggermente
328
sequenza più lunga sdi la media per tutti proteina geni codificanti (figura 2a, B). Sotto il avvertimento
329
che io qui considerato solo il variante di giunzione più lunga per gene, e questo più breve e senza introni
330
i geni potrebbero essere trascurato in il gene retrocopia/genitoriale pipeline di rilevamento, questo risultato
331
rivelare ed che retroposizione L1-mediata in trans è modulata in qualche misura dalla gene parentale
332
sequenza di mRNA lunghezza. Inqualunque caso, il sequenza lunghezza di BNT162b2 mRNA cascate molto vicino
333
alla lunghezza media dell'mRNA dei geni parentali (Fig. 2a, b), indicando che la lunghezza della sequenza
334
di BNT162b2 mRNA sarà probabilmente non essere un ostacolo alla retroposizione.
335
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12
336
Figura 2. Ildi base sequenza proprietà di BNT162b2 mRNA sono entro il gamma di
337
geni parentali che generano retrocopie. Ilgrafici jitter mostrare geni parentali (punti blu) e
338
Tutti geni (grigio punti) a caso distribuito lungo asse x. Il rosso triangolo Spettacoli BNT162b2
339
mRNA valori. Il significato di differenza tra parentale geni media (blu tratteggiato
340
linea) e Tutti geni medio (grigio solido linea) sono testato di permutazione test (t wo -tailed, 10 6
341
permutazioni). Iliniziale liste conteneva 503 umano (37) e 1.663 topo parentale nomi di geni
342
(40). Tutti i nomi di topi e 496 geni parentali umani sono stati collegati con successo alla sequenza
343
dati. poli- Acoda lunghezze erano ottenuto per 7.760 (organoidi, replicare 1) e 9.132 (iPSC,
344
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replicare 1) umano geni per mediang più stime per gene (84). A) Il confrontodi
345
lunghezze del cDNA nei topi ( p = 0; 22.770tutti i geni, 1.663 geni parentali, Insieme GRCm38.86).
346
B) Il confrontodelle lunghezze del cDNA negli umani ( p = 0;22.964 tutti i geni, 496 geni parentali,
347
Ensemble GRCh38.86) C)Il confronto di GC contenuto in i topi ( p= 0,00021; 22,770 Tutti
348
geni, 1.663 parentale geni, Insieme GRCm38.86) D)Il confronto di GC Contenuti in
confronto di poli-A lunghezza della coda s nell'uomoOrganoidi cerebrali derivati da iPSCs ( p = 0,69; 7,760
351
tutti i geni, 330 genitori geni, Ensemble GRCh38.84) F)Il confronto di coda di poli-A lunghezze
352
nell'essere umano staminali pluripotenti indotte cellule (iPSC) ( p =0,26; 9.132tutti i geni, 369 gene parentaleS,
353
Ensemble GRCh38.84)
354
355
Per migliorare il loro traduzione e stabilità, mRNA del vaccino sono frequentemente sequenza e/o
356
codone ottimizzato (1,6,52,136) e questa ottimizzazione potrebbe influenzare la GC contenuto. Quindi,vedere Se
357
il GC il contenuto di BNT162b2 mRNA è al di fuori il gamma di parentale geni ho esplorato i loro
358
Contenuto di GC nei topi e umani. Simile all'mRNAanalisi della lunghezza, contenuto GC di parentale
359
i geni mostra all'estero gamma di valori (Fig. 2c, d). Nei topi, media Contenuto GC dei genitori geni
360
è quasiuguale a il media del genoma (Fig. 2c) ,considerando che in umani geni parentali tendere a avere
361
leggermente più in basso GC medio contenuto (fig. 2d). sebbene il Contenuto GC di BNT162b2 mRNA
362
è superiore a media dei geni parentali, è ben all'interno del loro gamma (Fig. 2c, d), così è
363
improbabile che le peculiarità del contenuto di BNT162b2 GC ne impediscano la retroposizione.
364
365
Il sequenze di mRNA analizzato così lontano corrispondono alla bioinformatica cDNA sequenze; cioè
366
sequenza codificante più regioni non tradotte esclusa la coda poli- A. Comunemente, poli-Ale code sono
367
non considerati nelle analisi del genoma basata perché sono livello post-trascrizionale aggiunto, e si
368
era tecnicamente impegnativo recuperare con precisione i loro sequenza nucleotidica. Tuttavia, poli- A
369
sequenziamento delle codesi avvicina a il scala del trascrittoma sono continuamente migliorando e di recente
370
prodotto set di dati fornire un opportunità a ottenere intuizione in il distribuzione di i loro lunghezze
371
(84). Qui ho esploratolunghezze della coda di poli-A stimate utilizzando FLAM-seq nell'uomo indotto
372
gambo pluripotente cellule (iPSC) e derivati da iPSC cerebrale organoidi (84). iotrovato no differenza
373
tra le lunghezze medie della coda di poli-A del parentale noto geni e tutti i geni codificanti (Fig. 1e, f).
374
La distribuzione gamma di gene parentale poli-A lunghezze della coda è piuttosto ampio (fig. 1e, f), indicando
375
che il macchinario L1 è per lo più insensibile alla variazione delle lunghezze della coda di poli-A. Il BNT162b2
376
poli- Acoda con110 nucleotidi è bene dentro la gamma di questi valori, quindi non specifico
377
le difficoltà in retroposizione per quanto riguarda il poli-A coda lunghezza sono previsto. In t h rappresentapunto, io tè
378
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Vale la pena citare quella coda di poli-A è presente in altri mRNA candidati al vaccino anche
379
(5,137,138).
380
381
I geni dei genitori mostrano pregiudizi evolutivi
382
Questo semplice anno Domini hoccomparativo analisi Quello copertine la lunghezza, GC contenuto e poli- Acoda
383
lunghezza del genitore geni che attivamente produrre retrocopie esistenti popolazioni (Fig. 2) Potevo
384
essere ampliato considerando altri set di dati e tratti di sequenza, o utilizzando più sofisticati
385
approcci analitici. Però, suo principale lo scopo è a mostrare che efficacemente qualunque poli- Acoda
386
contenente mRNA in cellule umane, Compreso mRNA del vaccino, ha alcuni opportunità di essere integrato
387
in il genoma di L1 macchinari. io speranza, questo dovrebbe incitare sperimentale studi Quello volere
388
isti noinsieme a certezza se alcuni particolare mRNA specie è a prova di retroposizione e scoprire
389
meccanicistico motivi per tale comportamento (139). Sopra il Altro mano, noi e altri in precedenza
390
ha mostrato che analisi macroevolutiva computazionale sdi set di geni legato alla malattia e
391
altri fenotipi potrebbero portare intuizioni inaspettate (140-144) con potere predittivo che potrebbe
392
guidare gli esperimenti (145-148). Questoapproccio potrebbe anche essere applicato su il attualmente a disposizione
393
imposta di parentale geni Quello attivamente produrre retrocopie, però esso appareQuello questo ha non
394
è stato fatto così lontano (37,40). Riempire questo vuoto, a meno in parte, io fatto qui un pilota macroevolutivo
395
analisi.
396
397
In ordine a vedere Se il imposta di parentale geni Quello attivamente creare retrocopie in umano e
398
topo (37,40) ne ha un po' pregiudizio evolutivo, io analizzato l'origine filogenetica delle loro proteine
399
sequenze usando l'approccio filostratigrafico (figura 3). Ilprofili di arricchimento su il
400
Mappa phylostratigraphic s spettacoloche sebbene sequenza proteica di geni parentali potrebbe essere rintracciato
401
torna a una vasta gamma di filogenetici livelli (phylostrata - ps) tendono ad essere evolutivi vecchio
402
(figura 3). Ho trovato arricchimenti significativi tra i geni comuni a tutta la vita cellulare (ps1,
403
Fig 3), geni che ha avuto origine in archea (ps2, Fig3), e tra quelli che sono emersi al origine
404
di eucarioti (ps4, Fig 3). Questo risultato suggerisce che evolutivoantichi geni, per ancora
405
ragione sconosciuta, tendere a avere retroposizione più alta tariffe in regalo popolazioni. Ininoltre, questoS
406
rivela che esiste una certa prevedibilità nei modelli di retroposizione dell'mRNA endogeno. In
407
futuro opera questo pregiudizio Potevo essere Usato come un di partenza punto in ricerca di sottostante fattori Quello
408
correlare insieme a il gene età e direttamente promuovere o limite mRNA retroposizione in i topi e
409
umani. Trascrizione livelli, cellulare localizzazioni, traduzione aliquote, vari sequenza
410
caratteristiche, e mRNA regolamento e stabilità sono alcuni di il posizionesibile fattori Quello Potevo essere
411
in contrasto tra antichi phylostrata arricchito con geni parentali (ps1, ps2, ps4) e
412
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minore filostrato Quello mostrare esaurimento di loro (ps9-ps24). In un ideale Astuccio, meglio
413
comprensione di queste o Altro fattori Potevo infine guida esperimenti e aiuto in il
414
ingegnerizzazione di mRNA terapeutici resistenti alla retroposizione.
415
416
417
Figura 3. I geni parentali che generano le retrocopie nelle popolazioni umane e di topo
418
tendere a essere evolutivo antica. La filostratigrafica mappe di umano e topo proteina
419
codifica geni sono generato usando corrispondente consenso filogenesi contenente 24
420
internodi (phylostrata - ps). Per semplificare la presentazione dii risultati filostratigrafici umani
421
e topo phylogeni essono sovrapposto e mostrato in il inferiore pannello. Il Due filogenesi
422
differiscono solo negli ultimi due phylostrata (ps23, ps24); cioè Rodentia- M. musculus vs. Primates- H.
423
sapienslignaggio. Proteina sequenze di Tutti umano (ensemble GRCh38.86) e geni di topo
424
(Ensembl GRCm38.86) sono confrontati da BLAST contro il corrispondente riferimento personalizzato
425
banca dati (e-value 0.001) e mappato sul rispettiva filogenesi utilizzando la filostratigrafica
426
approccio (140,142,145,148). Il distribuzione di umano (483, blu numeri, (37) e topo
427
geni parentali (1659, numeri rossi, (40) sono mostrati a tlui in alto di superiore pannello. Le probabilità di log grafico
428
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nel mostra il pannello superiore deviazione da l'atteso frequenza di geni parentali in umani
429
(blu linea) e topi (rosso linea). Significatodi queste deviazioni è testato dal due - modo
430
test ipergeometrico aggiustato per confronti multipli (* P <0.05;** P < 0,01; *** P <0,001).
Archaea/Eukaryota e ps4 - eucariota) sono arricchiti per parentale geni. Iniziare con metazoi
433
(ps9), phylostrata . evolutivi più recenti mostrano un significativo esaurimento del numero di
434
geni parentali. Questoil modello filostratigrafico è efficace invariato nel gamma di e-value
435
cut-off da 1 a 10 - 20 , quindi potrebbe essere considerato abbastanza robusto (148).
436
437
Aspetti farmacologici
438
Sintetico mRNA avere piuttosto complesso farmacologia Quello è dipendente Su i loro nucleotide
439
sequenza, formulazione e via di somministrazione (10,52,149). Ilprobabilità di sintetico
440
mRNA genoma integrazione attraverso L1 elementi, al fianco il nucleotide sequenza, dipende Su suo
441
distribuzione in tessuti e organi, e alla fine su la sua concentrazionee stabilità nel cellula
442
citosol. Ilquantità di mRNA sintetico in una sola la dose è l'iniziale fattore che determina
443
la farmacocinetica e la farmacodinamica dell'mRNA vaccini (10.149), quindi è utile
444
considerare valori dichiarati per BNT162b2 e mRNA-1273. Inuna sola 30 μ g BNT162b2dose
445
(1,150) là sono in giro 1,3 x 10 13 sinteticomolecole di mRNA. Se noi ignorare perdita di vaccino
446
mRNA sulla via del citosol, e assumere la loro distribuzione omogenea tra all'incirca
447
3 x 10 12cellule nucleate in l'umano corpo (151), quindi ogni cellula nucleata potrebbe ricevere di
448
26 mRNA copie. Questo è sostanziale Quantità Se rispetto a il espresso umano proteina
449
geni codificanti che hanno in media 25 copie di mRNA per cella (152). Questei valori mostrano che
450
quantità di vaccino mRNA consegnato in a singola dose di BNT162b2 è abbastanza grande da
451
teoricamente riprogrammare il trascrittoma di ogni separare umano cellula chein principio Potere
452
subire retroposizione. Il non divulgato sequenza di vaccino mRNA-1273 impedisce simili
453
calcolo, ma sotto ipotesi che è lunghezza della sequenza e composizione nucleotidica è
454
comparabile a BNT162b2 (2,5,52), il numero di mRNA molecole per nucleato cellula sono
455
forse anche più alto perché una sola dose di mRNA-1273 il vaccino contiene 100 μ gdi sintetico
456
mRNA (2,52). Questo calcolo fornisce il superiore teorico limite di vaccino mRNA cellulare
457
assorbimento, però il inferiore limite è tanto Di più stimolante a stima dovuto a il complesso
458
farmacologia degli mRNA sintetici (10) e dati in letteratura piuttosto limitati (1,2,52,150).
459
460
Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
prestampa è il autore. Il preprint è fatto disponibile sotto a CC - Per attribuzione4.0 Internazionale licenza. Citazione:Domazet - Lo š o,
Tomislav. 2021. mRNAVaccini: Perché i sla b iology dir etroposizione ho ignorato?Preprint OSF. luglio24. doi:10.31219/osf.io/uwx32
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Dopo l'inoculazione intramuscolare BNT162b2 e mRNA-1273 mRNA le molecole dovrebbero raggiungere
461
il cellula citosol dove essi sono tradotto a SARS-CoV-2 arpione proteine, quale infine
462
suscitare la risposta immunitaria protettiva (1,2,52,149,153). Su questostrada dal sito di ingresso al
463
cellula citosol alcuni nudo e non modificato mRNA voluto essere soprattutto degradato di il
464
extracellulare onnipresente ribonucleasi (5,6,10,154). Il mRNA rimanenti Quello infine
465
entrare nella cellula per endocitosi prevalentemente finire intrappolata in endosom es e degrado
466
terminato tempo (10,52,153,154). Sopra superiore di questo, nudo mRNA insieme a non modificato nucleosidi sono
467
rilevato nell'endosoma e citosol per pattern recettori di riconoscimento, che innescando il
468
la segnalazione dell'interferone e altre vie promuovono la degradazione dell'RNA, inducono infiammazione e
469
inibire la traduzione e replica (5,10,52). Quindi anche se alcuni esterno gli mRNA raggiungono il citosol
470
i loro metà vita dovrebbe essere in gran parte compromesso. Queste multiplo innato immunità meccanismi
471
contro gli RNA esterni mostrano che le cellule eucariotiche sono sotto forte pressione selettiva da evitare
472
trascrittoma riprogrammazione. Di prevenire l'entrata e attività di esterno mRNA in il
473
citosol, queste protettivo meccanismi anche in gran parte precludere possibile interazione di esterno
474
mRNA e macchinario endogeno L1, e di conseguenza riducono le possibilità che alcuni
475
gli mRNA esogeni subiscono retroposizione.
476
477
Però, mRNA vaccini a essere efficace dovere superare queste innato difesa meccanismi
478
contro gli RNA esogeni, raggiungere il citosol, e devono essere tradotto in modo efficiente da ribosomi
479
(6,10). In il caso di BNT162b2 e mRNA-1273 vaccini questo è raggiunto di elabortire
480
ottimizzazioni di sequenza e nucleoside modifiche che si stabilizzano sintetico mRNA e fare
481
loro in gran parte invisibile ainnato difesa meccanismi (1,2,6,10,52). Per ulteriore proteggere loro
482
dal duro ambienti extracellulari, essi sono formulato in lipidi nanoparticelle (LNP)
483
che facilitano il loro cellulare assorbimento e ingresso nel citosol per fuga endosomiale (1,2,10,52,149). è
484
importante per Nota che questi notevole risultati di ingegneria Quello migliorare il vaccino mRNA
485
consegna del citosol aumentare inavvertitamente le possibilità di mRNA del vaccino retroposizione (fig. 1c).
486
questa mancanza gambi dal fatto che, in principio, qualsiasi miglioramento in il vaccino mRNA
487
il rilascio di citosol aumenta la probabilità di interazione con il macchinario endogeno L1.
488
Tuttavia, indipendentemente di il è aumentato stabilità e LNP formulazione di vaccino mRNA,
489
frazione sostanziale dell'iniziale la dose èdegradato e non sarà mai raggiungere il citosol (149,153).
490
Sfortunatamente, accessibile informazione in il pubblico dominio Su il BNT162b2 e mRNA-
491
1273 fa non rivelare quale percentuale?età di l'iniziale mRNA del vaccino la dose diventa biodisponibile
492
nel citosol (1,2,149). Inqualunque Astuccio, ulteriori miglioramento nel citosol consegna di vaccino
493
mRNA, quale è un pesantemente perseguito obiettivo inil mRNA vaccinologia campo
494
Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
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(6,10,149,153,155,156), aumenterà contemporaneamente le possibilità diRetroposizione mediata da L1
495
(Fig. 1c).
496
497
Ogni mRNA molecola nel citosol sarà alla finedecadimento attraverso uno dei tanti degrado
498
percorsi (157,158). In contrasto a esogeno vaccino mRNA Quello una volta degradato sono non
499
sostituiti (6,10,155), i livelli di mRNA endogeni sono controllati dall'interazione tra
500
trascrizione e decadimento (157,158). Cadoaltri parametri vengono ignorati, questo significherebbe che il
501
probabilità di L1 -mediatala retroposizione è più altaper un endogeno gene con tipicolivelli
502
di espressione th un forun mRNA del vaccino che è transitoriamente presente in la cellula. Tuttavia, diversi
503
fattori aggiuntivi aumentano le possibilità di retroposizione dell'mRNA del vaccino. Il numero di
504
dosi ricevute per individuo aumenta direttamente la possibilità di retroposizione perché si prolunga
505
il tempo per il incontrare di vaccino mRNA conL1 macchinari. Attualmente, BNT162b2 e
506
mRNA-1273 sono amministrato per via intramuscolare come un serie di due dosi, tre settimane e uno
507
mese di distanza rispettivamente (1,2,52). Qualunque eventuale aumentare inil numero di necessario le dosi sarebbero
508
aumentare ulteriormente le possibilità di vaccino retroposizione dell'mRNA. Questo potrebbe essere un particolarmenteprominente
509
problema Se il mRNA vaccini voluto richiedere lungo termine ricorrente applicazione — Come in il
510
caso dell'attuale programma di vaccinazione stagionale contro l'influenza (159).
511
512
Proprietà aggiuntiva che influenza la verosimiglianza dell'integrazione del genoma dell'mRNA del vaccino è il
513
stabilità di mRNA del vaccino molecole. Ilfatturato di endogeno molecole di mRNA in
514
eucariotico cellule Spettacoli Grande variabilità, insieme a stimato media metà vita di in giro 7 ore
515
(160). Il preciso misure di il vaccino emivita dell'mRNA in le cellule sono non pubblicamente
516
a disposizione (1,2), ma esso è chiaro Quello il sequenza e codone ottimizzazione di vaccino mRNA
517
aumenta i loro funzionale metà vita con un scopo a Ottimizzare i loro traduzione efficienza
518
(6,10,27,52,160,161). indubbiamente, questo prolungato funzionale metà vita aumenta il possibilità
519
Quello vaccino mRNA incontrare L1 macchinari e infine retroporre in ail genoma. In
520
Inoltre, rimane inesplorato il modo in cui gli mRNA del vaccino interagiscono con i granuli di ribonucleoproteina
521
che partecipano alla regolamentazione del Stoccaggio e decadimento dell'mRNA (28,157,162,163) ascosì come con
522
il citoplasma che risiede nelle particelle ribonucleoproteiche L1 (139).
523
524
Profili di biodistribuzione
525
UN b profilo di distribuzioneè un altro importante parametro che determina la probabilità di
526
vaccino mRNA genoma integrazione perché il attività di L1 elementi differisce tra il
527
cellule, tessuti e organi (94,95,109). Interessante, direttostudi sulla biodistribuzione hanno non è stato
528
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condotto per il Vaccino BNT162b2 (1). Tuttavia, studi surrogati nei topi e i ratti indicano
529
distribuzione, in diverso le quantità, a partire dal il iniezione posto a maggior parte tessuti, compreso il fegato,
530
ghiandole surrenali, milza e gonadi (1). Distribuzione diretta e studi di farmacocinetica per il
531
vaccino mRNA-1273 anche non lo erano condotto, ma studi sui ratti usando il stessi LNP e un
532
cocktail di mRNA codifica antigeni del citomegalovirus indicare Quello questi mRNA, insieme a il
533
eccezione di rene, potrebbe essere rilevato avari livelli in tutto esaminato tessuti compresi il
534
iniezione posto muscolo, prossimale e distale linfa nodi, milza, occhi, cuore, polmone, cervello e
535
testicolo(2). In particolare, il distribuzione di mRNA a ovaie ènon testato perché nessuna femmina ratti
536
erano incluso in questo studio, come spiegato in il normativo documenti (2). Ovviamente, queste
537
profili di biodistribuzione surrogati si sovrappongono sostanzialmente con organi noti per mostrare l'attività
538
di L1 elementi Come fegato (122), milza (101), cervello (56,94,112-116), surrenale ghiandole (101),
539
muscoli (99,126,164) e gonadi (91,100,101,104,107).
540
541
Se la quantità di vaccino mRNA in una singola dose di Viene considerato BNT162b2 o mRNA-1273,
542
esimo esenessuno dei due rigorosamente localizzato né completamente sistemico distribuzione modelli suggerire Quello in alcuni
543
fazzoletti mRNA del vaccino probabile si accumula in piuttosto alto concentrazioni, con potenziale per
544
saturare l'esogeno mRNA assorbimento capacità del destinatario cellule (10,165). Per valutare di più
545
proprio la probabilità di retroposizione mediata da L1, è importante capire quale cella
546
i tipi possono assorbimento mRNA del vaccino. Cellule dendritiche e macrofagi presenti al inoculazione
547
posto e nodi drenanti sono, secondo a il organismo di regolamentazione, il Due principale cellula tipi
548
preso di mira da BNT162b2 e vaccini mRNA-1273 (166). Però,la valutazione rapporto per
549
il BNT162b2 vaccino stato sQuello è sconosciuto se Altro cellule di professionale antigene
550
presentando le cellule (APC) può esprimere transitoriamente il vaccino picco derivato proteine (1).
551
Allo stesso modo, il vaccino mRNA-1273 rapporto di valutazione dichiara che il consegnato vaccino
552
mRNA è principalmente espresso di macrofagi e dendritico cellule (2). Questo apparentemente rivela
553
che l'mRNA-1273 è espresso in altri tipi di cellule pure . èanche indicativo che il
554
meccanismi di azione che guiderebbe BNT162b2 e mRNA-1273 esclusivamente/preferenzialmente
555
alle cellule dendritiche e ai macrofagi, se esiste, non è spiegato in questi documenti (1,2,166).
556
557
Sebbene i macrofagi e dendritico cellule, come antigene professionale presentando cellule (APC), sono
558
specializzato nella campionatura il loro ambiente, essenzialmente tutti le cellule nucleate sono endocitosi
559
competente. La provada diversi gli studi indicano che l'assorbimento cellulare dell'mRNA
560
LNP si affida al'apolipoproteina E (ApoE) vincolante a LNP e loro successiva endocitosi
561
questo è facilitato di bassa densità lipoproteine (LDL) recettori (52,165,167,168). Da quando ApoE,
562
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I recettori LDL e LDL-like sono espressi da molti tipi di cellule in tutto il corpo (169,170)
563
esso potrebbe essere mi aspettavo che Gli APC sono non il solo cella tipi che interiorizzare l'mRNA LNP
564
(52,168). Per esempio, alcuni studi indicare Quello miociti, cellule epiteliali e fibroblasti
565
assorbimento vaccino mRNA e contribuire a suo espressione (52,171–173). Queste considerazioni
566
suggerire quella cellula tipi altro di dendritico cellule e la maggior parte dei macrofagi probabilmente interiorizzare
567
BNT162b2 e mRNA-1273 vaccino mRNA, e che il potenziale incontrare di L1
568
macchinari e vaccino mRNA Maggioverificarsi in vario cellula tipi entro il ampio gamma di
569
tessuto s.
570
571
Un altro livello di complessità nel trasporto e assorbimento di LNP-formulato mRNA esogeno
572
nasce con il recente scoperta che, dopo endocitosi, LNP contenenti mRNA sono riconfezionati
573
in tardi endosomi e secreto Indietro in extracellulare spazio come extracellulare vescicole (EV)
574
(Fig. 1c) (53). Queste vaccino mRNA veicoli elettrici (endo- EV )proteggere esogeno mRNA in
575
extracellulare fluidi durante in vivotrasporto a altri organi, e consegnare esogeno intatto
576
mRNA al citoplasma di le cellule riceventi distanti (53,54,174-176). A causa del loro piccolo
577
vaccino di tagliamRNA EV sono meno visibile di LNP innato meccanismi di immunità e può
578
passano attraverso l'endotelio vascolare e la matrice extracellulare (53,177). Dato che molti
579
tipi di cellule compresi i dendritici celle (178) an d macrofagi(179) secernono veicoli elettrici, il gamma di cellule
580
e i tessuti che gli mRNA esogeni potrebbero raggiungere è sostanzialmente ampliato, se confrontato con
581
percorso LNP solo (fig. 1c). Un recente spettacoli di lavoro che L1 mRNA in colto le cellule potrebbero anche
582
essere confezionato in aveicoli elettrici, consegnato tramite veicoli elettrici a destinatario cellule e retroposto in i loro genoma
583
(Fig. 1a) (51). Insieme,questo suggerisce che la dinamica dei veicoli elettrici aumentare sostanzialmente le probabilità per
584
l'interazione tra elementi L1 attivi e mRNA del vaccino (Fig 1c).
585
586
La possibilità di integrazione del genoma dell'mRNA del vaccino nelle cellule somatiche e germinali (Fig. 1) è
587
non è l'unico effetto negativo che dovrebbe essere considerato. In teoria, il vaccino mRNAPotevo
588
anche essere ereditati epigeneticamente attraverso il carico di RNA spermatico (180–183). Questo potrebbe accadere se il
589
cellule del testicolodel germinativo maschile assorbimento di linea LNP so veicoli elettrici contenente vaccino mRNA,
590
e Se queste mRNA poi fine su in spermatozoi (181.182.184). In alternativa, durante i loro
591
maturazione funzionale in epididimo, spermatozoi potrebbe potenzialmente attivamente internalizzare vaccino
592
mRNA consegnati da EV epididimali (183,184).
593
594
Osservazioni finali
595
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Ci sono altri punti che dovrebbe essere menzionato. Diversi giornali riportano che l'infezione di
596
umano cellule di virus, Compreso SARS-CoV-2, aumenta attività di i loro endogeno L1
597
retroelementi (185–188) — coerente insieme a il presunto ambientale modulazione di L1
598
attività (109). Questi risultati suggeriscono che, paradossalmente, la vaccinazione con mRNA durante la vaccinazione attiva o
599
dopo risolto virale infezione potrebbe aumento possibilità di vaccino mRNA genoma integrazione.
600
Il COVID-19 mRNA del vaccino codice per Proteina spike SARS-CoV-2 (52), quindi è importante
601
sapere se ci è qualsiasi prove che SARS-CoV-2 mRNA potrebbe integrarsi nel genoma.
602
Infatti, un recente studio Spettacoli Quello su infezione SARS-CoV-2 subgenomico mRNA Potere essere
603
retrotrascritto di L1 elementi e integrato in il genoma di infetti cellule (185).
604
È interessante notare che frammenti di mRNA più vicini al 3' fine di il SARS-CoV-2 genoma, compreso
605
arpione mRNA, sono Di più frequentemente integrato nel cellula DNAdi il sequenze più vicine a
606
il 5' fine (185). Questa integrazione il pregiudizio potrebbe essere relativo a le differenze nel abbondanza di
607
mRNA subgenomici SARS-CoV-2 (189) come suggerito dagli autori (185). Tuttavia, èPotevo
608
riflettono anche l'architettura annidata degli mRNA subgenomici (189) accoppiato con il meccanismo
609
di L1 retroposizione che si basa sul poli- A coda(49) ed è propenso a troncare le trascrizioni insieme a
610
distanza crescente dall'estremità 3'.
611
612
Attività di retrotrasposoni L1 è strettamente legato con replicazione (45,81,190,191), ed è suggerito
613
che la retroposizione degli mRNA cellulari è accoppiata alle divisioni cellulari (37,60). Questo implica che
614
il rischio di genoma dell'mRNA del vaccino l'integrazione potrebbe essere aumentato nell'essere umano cellula proliferante
615
popolazioni. Ilprofili di biodistribuzione di mRNA del vaccino sono non disponibile per i tumori,
616
però è aumentato replica attività accoppiato insieme a elevato L1 retrotrasposizione intumore
617
celle (79)farli un favorevoleambiente per possibile mRNA del vaccino integrazione del genoma.
618
A questo proposito, sarebbe molto istruttivo per testare il profilo di biodistribuzione dei vaccini mRNA in
619
modelli tumorali murini, e per cercare eventuali eventi di retroposizione somatica.
620
621
Al prima vista, esso sembra che l'applicazionezione di vaccini mRNA Potevo non alterareil primario
622
tassi di retroposizione al'individuo e livello di popolazione. Il sottostantela ragione è che vaccino
623
Gli mRNA non sono direttamente mutageni e questo il loro percorso verso potenziali cardini di integrazione del genoma
624
Su il endogeno cellulare meccanismi; cioè il attività di L1 elementi che continuamente
625
operare Su il a disposizione mRNA piscina. Tuttavia, il possibile modificare in primario
626
i tassi di retroposizione non dovrebbero essere immediatamente licenziato perché non può essere escluso senza
627
test che vaccinazione insieme a LNP -mRNA formulatifare non modula L1 attività. Come già
628
spiegato, è assodato che molti fattori esogeni modificano L1 attività (109),
629
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Compreso infezione virale (185-188), quindi l'impatto di mRNA la vaccinazione dovrebbe anche essere
630
valutata al riguardo.
631
632
Dall'altra mano, èè evidentequell'eventuale vaccino genoma mRNA l'integrazione si amplia il
633
spettro di sequenze immaginabili che potrebbero essere retrocopiate (Fig. 1). Le nostre cellule si sono evolute sotto
634
pressione mutazionale che deriva dall'attività di Elementi L1 che generano retrocopie di
635
il nostro nativo geni (37,40). in ogni caso, iltrasfezione umana cellule con esogeno e
636
modificato artificialmente mRNA s, cheavere del potenziale essere retrocopiato in il genoma (figura 1c),
637
estende la mutazione standard spazio di sequenza al regno delle modificazioni transgeniche. è
638
piuttosto chiaro che ogni possibilità della transgenesi in gli umani hanno preoccupazioni etiche che dovrebbe essere
639
adeguatamente indirizzato.
640
641
La retroposizione di un vaccino molecola di mRNA è in principio un casuale evento che può verificarsi
642
in qualunque cellula trasfettata Questo mostra l'attività di L1 elementi (Fig. 1c). Il clonale espansione
643
di una nuova retrocopia dipende in gran parte dai suoi effetti fenotipici e dal preesistente proliferativo
644
capacità della cellula mutata . Ad un estremo,una retrocopia dell'mRNA del vaccino che direttamente
645
inattiva e gene essenziale (92,192) risulterebbe in cella morte che voluto precludere qualsiasi ulteriore
646
diffusione di quello retrocopia. Tuttavia, una retrocopiaquesto è moderatamente deleterioo neutrale
647
(141.193), e ha è emerso in un cellula insieme a alto proliferativo potenziale, ha Buona probabilità a essere
648
propagato a il grande numero di discendente cellula s.In adulti, i proliferativo capacità di molti
649
cellule del soma è considerevolmente limitata (193.194), ed i t ulteriori gocce con invecchiamento (195). Questo
650
implica Quello il vaccino retrocopia dell'mRNA mosaicismo in il soma adulto dovrebbe essere in gran parte
651
limitato a più piccoli cellula grappoli o individuale cellule. Tuttavia, un retroposizione evento in un
652
progenitore cellula, un adulto stelo cellula (196) o un premaligna cellula (193) voluto guida a clonale
653
espansione della retrocopia in pezzi molto più grandi di tessuto somatico.
654
655
In contrasto con effetti relativamente limitati di retroposizione somatica, a possibile vaccino ereditario
656
mRNA evento di retroposizione voluto avere un Di più impatto di vasta portata di rendering completamente
657
Transgenico individui. L'ipotetico mRNA del vaccino retrocopia con potenziale ereditabile
658
potrebbe verificarsi in cellule germinative o in il cellule pluripotenti di presto embrioni (92). Comegià
659
discusso sopra, il documenti delle agenzie di regolamentazione affermare che il biodistribuzione surrogata
660
studi rapporto distribuzione di mRNA LNP-formulato a gonadi (1,2), quale sono conosciuto a
661
attività di visualizzazione di elem enti L1(91,94,100,101,104-107). Sull'altra mano, mRNA del vaccino
662
immagazzinato lo sperma RNA il carico potrebbe ipoteticamente raggiungere il cellule pluripotenti di presto
663
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embrioni, che sono i punti caldi di L1 attività (88–90,92,102,103), e subire la retroposizione
664
là. Questoa sua volta potrebbe risultare in somatico mosaicismo dove il parte sostanziale di cellule in an
665
individuale potrebbe diventare Transgenico, e Se il gonadi sono anche colpito, il retrocopia Potevo
666
diventare ereditabile (92,108).
667
668
Il fenotipo di un vaccino La retrocopia dell'mRNA sarà dipendere, tra altri fattori, su il numero
669
e identità di cellule che diventa transgenico, il luogo di inserzione, completezza di l'inserito
670
sequenza, direzione di il inserimento, particolarità del destinatario genoma e l'espressione
671
potenziale di il retrocopia. Sebbene nativo mRNA la mancanza trascrizione-guida elementi esso è
672
ben consolidato quello più del loro le retrocopie mostrano prova di trascrizione (38,40,41), quindi
673
esso potrebbe essere mi aspettavo che un ipotetico mRNA del vaccino la retrocopia sarebbe avere anche Buona
674
possibilità a essere espresso. Molti espresso retrocopie di nativo geni tende a avere un forte
675
impatto negativo sulla forma fisica e sono quindi relativamente rapidamente purgato dal popolazione (40).
676
È stato suggerito che questi deleteri gli effetti delle retrocopie espresse sono spesso correlati a il
677
interferenza con i loro genitori geni (40). Dal vaccino ipotetico retrocopia dell'mRNA fa
678
non avere un gene parentale nell'ospite genoma (Fig 1c), effetti correlati all'espressione
679
non sono possibili interferenze tra la retrocopia e il suo gene parentale. Tuttavia, un
680
espresso retrocopia di vaccino l'mRNA potrebbe interagire in modi imprevedibili insieme a il ospite
681
immune sistema, dopovirale infezioni, e vaccino mRNA ricevuto in successivo
682
turni amministrativi.
683
684
Conclusioni
685
Attuale ingegneria strategie (136) e dichiarato futuro indicazioni (136,197) per il
686
miglioramento di mRNA vaccini fare non tener conto di il possibilità di vaccino mRNA genoma
687
integrazione tramite Retroelementi L1 originario di cellule umane. Questoè a quote con la conoscenza base
688
sulla biologia di L1-based retroposizione e il suo ruolo nella genetica,sviluppo, e
689
l'evoluzione di umani. Perchè questoil rischio è trascurato è pari più oscuro sapendo che l'mRNA
690
retroposizione è un biomedico riconosciuto fenomeno al di fuori vaccinologia
691
(42,47,58,61,62,64,65,72,74,75,78). Peralleviare questi discrepanze tra campi, è
692
voluto essere critico a design e eseguire sperimentale studi Su animale Modelli Quello scopo a
693
rilevare l'esistenza del vaccino mRNA retrocopie e stimare la loro retroposizione frequenze.
694
come luipropensione alla retroposizione tramite L1 retroelements è sequenza dipendente, è sarebbe
695
consigliabile a indipendentemente test ogni mRNA terapeutico candidato. Questo informazione Potevo
696
Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
prestampa è il autore. Il preprint è fatto disponibile sotto a CC - Per attribuzione4.0 Internazionale licenza. Citazione:Domazet - Lo š o,
Tomislav. 2021. mRNAVaccini: Perché i sla b iology dir etroposizione ho ignorato?Preprint OSF. luglio24. doi:10.31219/osf.io/uwx32
24
allora guida ulteriore mRNA del vaccino perfezionamenti in il direzione di evitando attivo L1 cellulare
697
ambienti (198), o migliorando la loro resilienza alla cattura del macchinario L1 (97).
698
699
Ogni tecnologia è un doppio taglio spada, e mRNA terapeutici non sono un eccezione. In
700
questo complesso La crisi del COVID-19 è essenziale che tutto pro e contro del controllo le misure,
701
procedure, trattamenti, profilassi e vaccino le tecnologie sono continuamente apertamente discusso
702
e valutato con cautela a partire dal molti angoli. Un incoraggiante esempio in questo la direzione è
703
articoli di recente pubblicazione che, in modo equilibrato, discutono degli aspetti negativi largamente ignorati
704
di Pandemia di covid-19 controllo le misure e pratiche Su il generale umano microbioma
705
(199), microbioma neonatale (200) e immunità (201). spero che il possibile interazione
706
tra i vaccini mRNA e gli elementi L1 qui presentati provocherà anche il dibattito e attirerà
707
l'attenzione dei ricercatori in una vasta gamma di discipline.
708
709
Se o non il attuale vaccino mRNA Potevo integrare in il genoma, e di quale
710
frequenza, deve essere in definitiva dimostrato da esperimenti. Tuttavia, èrimane sconcertante perché e
711
come il campo della vaccinologia dell'mRNA ha trascurato la biologia della retroposizione dei retroelementi L1 e
712
suo teorico link a possibile vaccino mRNA retroposizione, Se uno considera il volume,
713
visibilità e significato di il L1 (42,43,56,78–80,99,112) e retroposizione ricerca (36–
714
41,43,44,47,56,62,64,72,75). Il campo della vaccinologia dell'mRNA ha iniziato il suo sviluppo più di
715
30 anni fa (11,31) e Retroelementi L1 in umani sono studiato per Di più di 40 anni
716
(202,203) ma ovviamente senza qualunque diafonia tra il due campi. Questoimbarazzante effetto silo
717
punti Quello in alcuni occasioni il strutturale inconvenienti di contemporaneo scienza, nonostante suo
718
accumulo, globalizzazione e senza precedenti diffusione, sono più profondi di quanto siamo disposti a
719
ammettere. io concludere Quello il a grandi linee reiterato dichiarazione Quello a base di mRNA terapeutici Potevo
720
non impatto genomi è un supposizione infondata di non chiaro origine. Ciò implica che il attuale
721
vaccino mRNA valutazioni, mancano gli studi Quello nello specifico indirizzo genoma integrazione, sono
722
insufficiente dichiarare i loro genoma integrazione sicurezza. In questo considerare, esso è importante che il
723
nucleotide esatto sequenze di mRNA i vaccini sono facilmente pubblicamente accessibile, compreso Prodotto
724
documenti informativi (204.205), per consentire inequivocabilee monitoraggio indipendente di possibile
725
vaccino mRNA integrazione in il somatico e germinativo genomi di già vaccinato
726
persone e la loro progenie.
727
728
Ringraziamenti
729
Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
prestampa è il autore. Il preprint è fatto disponibile sotto a CC - Per attribuzione4.0 Internazionale licenza. Citazione:Domazet - Lo š o,
Tomislav. 2021. mRNAVaccini: Perché i sla b iology dir etroposizione ho ignorato?Preprint OSF. luglio24. doi:10.31219/osf.io/uwx32
25
Ringrazio S. Koska per l'assistenza con bioinformatica, S. Koska e N. Čorak per la figura
730
preparazione, M. Futo per aiuto con formattazione del manoscritto e S. Koska, N. Čorak e M. Futo
731
per la lettura critica del manoscritto. Questo lavoro è stato in parte sostenuto dalla Croatian Science
732
Fondazione nell'ambito del progetto IP-2016-06-5924, la Fondazione Adris e l'European
733
Regionale Fondo di sviluppo (KK.01.1.1.01.0009 DATACROSS). iodichiarare no conflitto di
734
interesse.
735
736
Letteratura
737
738
1. Agenzia europea per i medicinali. Rapporto di valutazione della comunità. 2020 dic.
Prestampe OSF, prestampa doi: https://doi.org/10.31219/osf.io/uwx32 ; questoversione pubblicata il 2 6 luglio 2020.Il detentore del copyright per questo
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